细菌的鉴定方法
（一）淀粉水解试验
1.原理
细菌对大分子的淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必须靠产生的胞外酶，如淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶将大分子物质分解。胞外酶能分泌扩散到细胞外，将物质分解成小单位如糖、氨基酸、甘油与脂肪酸。这些小单位的物质能被细菌吸收和利用。水解过程可通过底物的变化来证明，如细菌水解淀粉的区域，用碘测定不再产生蓝色；水解明胶可观察到明胶被液化；脂肪水解后产生脂肪酸改变培养基的pH，其中的中性红指示剂使培养基从淡红色变为深红色。
2.方法
将淀粉培养基溶化后，冷至45℃左右，以无菌操作制成平板。取18～24h的纯培养物点于平板上，每皿可点种3～5个菌株，适温培养2～4d，形成菌落后，在平板上滴加卢戈氏碘液，以铺满菌落周围为度，平板呈蓝色。如果菌落周围有无色透明圈出现，说明淀粉已经被水解，实验为阳性，否则为阴性。透明圈的大小一般说明水解淀粉的能力。
（二）糖发酵试验
1.原理
单糖发酵是将葡萄糖、乳糖或麦芽糖等分别加入蛋白胨水培养基内，使其最终浓度为0.75%～1%。并加入一定量酚红指示剂及小倒管，制成单糖发酵管，接种细菌经37℃培养18～24h，若能分解糖产酸则酚红指示剂由红变黄，若能分解甲酸有CO2和H2等气体形成，小倒管内则聚集有气泡；不分解，则指示剂不变色。
2.材料
（1）菌种
大肠埃希菌、伤寒沙门菌18～24h琼脂斜面培养物。
（2）培养基
葡萄糖发酵管、乳糖发酵管等。
3.方法
将大肠埃希菌、伤寒沙门菌按照液体接种方法分别接种于葡萄糖及乳糖发酵管内，置37℃孵箱培养18～24h，观察结果。由于一些细菌能分解某种糖类产酸，所以培养基中pH下降到7.0以下，在酚红指示剂的显示下，培养基颜色由红变黄。产酸者以“+”表示；如果同时产生气体，则培养基中小倒管内有气泡出现，此乃产酸又产气，以“⊕”表示；不分解，则指示剂不变色，用“-”表示。
4.结果
（三）甲基红（M-R）试验
1.原理
某些细菌如大肠埃希菌等分解葡萄糖产生丙酮酸，继而分解为甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基pH值降至4.5以下，加入甲基红指示剂呈红色，此为阳性反应；若产酸量少或产生的酸进一步转化为醇、醛、气体和水等，则培养基的酸碱度仍在pH 6.2以上，加入甲基红指示剂呈现黄色，为阴性反应。
2.材料
（1）菌种
大肠埃希菌、产气杆菌18～24h琼脂斜面培养物。
（2）培养基
葡萄糖蛋白胨水培养基。
（3）试剂
甲基红试剂。
3.方法
分别将大肠埃希菌、产气杆菌接种于2支葡萄糖蛋白胨水培养管中，置37℃培养2～3d取出，分别滴加甲基红试剂2～3滴，混匀，观察结果。
4.结果
大肠埃希菌：+；产气杆菌：-。
（四）吲哚（Indole）试验
1.原理
某些细菌如大肠埃希菌、变形杆菌等具有色氨酸酶，能分解蛋白胨水培养基中的色氨酸，产生靛基质（无色吲哚），再与欧立希试剂（对二甲基氨基苯甲醛）反应，形成红色化合物——玫瑰吲哚，即为阳性反应。
2.材料
（1）菌种
大肠埃希菌、伤寒沙门菌18～24h琼脂斜面培养物。
（2）培养基
蛋白胨水培养基。
（3）试剂
吲哚（靛基质）试剂。
3.方法
分别将大肠埃希菌、伤寒沙门菌接种于2支蛋白胨水培养管中，置37℃培养2～3d后，每管沿管壁各加吲哚试剂于培养液面上，待1～2min后观察结果：在交界面出现玫瑰红色环即为吲哚试验阳性，无红色环即为阴性。
4.结果
大肠埃希菌：+；伤寒沙门菌：-。
（五）硝酸盐还原试验
1.原理
硝酸盐还原反应包括两个过程：一是在合成过程中，硝酸盐被还原为亚硝酸盐和氨，再由氨转化为氨基酸和细胞内其他含氮化合物；二是在分解代谢过程中，硝酸盐或亚硝酸盐代替氧作为呼吸酶系统中的终末受氢体。能使硝酸盐还原的细菌从硝酸盐中获得氧而形成亚硝酸盐和其他还原性产物。但硝酸盐还原的过程因细菌不同而异，有的细菌仅使硝酸盐被还原为亚硝酸盐，如大肠埃希菌；有的细菌则可使其还原为亚硝酸盐和离子态的铵；有的细菌能使硝酸盐或亚硝酸盐还原为氮，如假单胞菌等。硝酸盐还原试验系测定还原过程中所产生的亚硝酸盐。
2.材料
（1）菌种
各种细菌。
（2）培养基
硝酸盐培养基。
（3）试剂
硝酸盐还原甲、乙液。
3.方法
被检菌接种于硝酸盐培养基中，于35℃培养1～4d。将硝酸盐还原甲、乙液等量混合后（约0.1mL）加入培养基内，立即观察结果。
4.结果(https://www.daowen.com)
出现红色为阳性。若加入试剂后无颜色反应，可能是：
①硝酸盐没有被还原，试验阴性；
②硝酸盐被还原为氨和氮等其他产物而导致假阴性结果，这时应在试管内加入少许锌粉，如出现红色则表明试验确实为阴性。若仍不产生红色，表示试验为假阴性。
若要检查是否有氮气产生，可在培养基管内加一小倒管，如有气泡产生，表示有氮气生成。
5.应用
本试验在细菌鉴定中有广泛应用。肠杆菌科细菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐；铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌等假单胞菌可产生氮气；有些厌氧菌如韦荣球菌等试验也为阳性。
（六）产氨实验（尿素分解实验）
1.原理
某些细菌（如变形杆菌）具有尿素分解酶，能分解尿素而产生氨，氨溶于水变成氢氧化铵，使培养基变碱性而呈红色即为阳性。
2.材料
（1）菌种
变形杆菌、伤寒沙门菌18～24h琼脂斜面培养物。
（2）培养基
尿素培养基。
3.方法
分别以斜面接种法将变形杆菌、伤寒沙门菌接种于2支尿素斜面培养管上，置37℃培养18～24h，观察结果，培养基变为红色，即尿素分解试验阳性；若不变色，即为尿素分解试验阴性。
4.结果
变形杆菌：+；伤寒沙门菌：-。
（七）枸橼酸盐利用试验
1.原理
某些细菌能以铵盐为唯一氮源，并且利用枸橼酸盐作为唯一碳源，可在枸橼酸盐培养基上生长。细菌生长过程中分解枸橼酸盐产生碳酸盐和分解铵盐生成的氨，使培养基变碱性，使指示剂变色。
2.材料
（1）菌种
各种细菌。
（2）培养基
枸橼酸盐培养基。
3.方法
将某被检查部位取得的被检菌接种于枸橼酸盐培养基，于35℃培养1～4d，每日观察结果。
4.结果
培养基中的溴麝香草酚蓝指示剂由淡绿色变为深蓝色为阳性；不能利用枸橼酸盐作为碳源的细菌，在此培养基上不能生长，培养基则不变色，为阴性。
5.应用
用于肠杆菌科中菌属间的鉴定。在肠杆菌科中埃希菌属、志贺菌属、爱德华菌属和耶尔森菌属均为阴性，沙门菌属、克雷白菌属通常为阳性。
（八）油脂水解试验
1.原理
某些细菌能够分泌脂肪酶（胞外酶），能将培养基中的脂肪水解为甘油和脂肪酸。所产生的脂肪酸，可通过预先加入油脂培养基中的中性红加以指示。当细菌分解脂肪产生脂肪酸时，培养基中出现红色斑点。
2.材料
（1）菌种
各种细菌。
（2）培养基
油脂培养基。
3.方法
在油脂培养基上一半接种金黄色葡萄球菌作为阳性对照菌，另一半接种实验菌大肠埃希菌或产气肠杆菌。接种时用接种环取少量菌在平板2边各划线接种。将接种完的平板倒置于37℃恒温箱中，培养24h。
4.结果
平板上长菌的地方，如出现红色斑点，即说明脂肪已被水解，此为阳性反应。
（九）接触酶试验
1.原理
接触酶又称为过氧化氢酶，是一种以正铁血红素作为辅基的酶，能将过氧化氢分解为水和氧。一般好氧细菌与兼性厌氧细菌（除某些链球菌、乳酸杆菌等外）都能产生接触酶，而厌氧细菌不产生接触酶，这是区别好氧菌和厌氧菌的方法之一。
2.材料
（1）菌种
各种细菌。
（2）培养基
牛肉膏、蛋白胨琼脂培养基。
（3）试剂
3%过氧化氢。
3.方法
接种受试菌，适温下培养18～24h，将3%的过氧化氢滴于斜面菌苔上（或涂有菌苔的载玻片上），静置1～3min后，如有气泡产生即为阳性。不产生气泡者为阴性。
4.应用
革兰阳性球菌中，葡萄球菌和微球菌均产生过氧化氢酶，而链球菌属为阴性，故此试验常用于革兰阳性球菌的初步分群。