五、细胞冻存

1.细胞冻存前一天进行细胞换液，显微镜下观察，保证所有细胞无菌且生长状态较好。

2.配制细胞冻存液：1mLDMSO、2mL血清、7mL培养液混合。

3.吸弃培养基，PBS清洗2次，胰酶消化后以900r/min离心5min，弃上清，适量冻存液悬浮细胞（缓慢加入），用血球计数板计数，调节细胞密度为104～105个/mL，分管冻存于细胞保藏盒中。(https://www.daowen.com)

4.标明保藏日期，置于4℃30min后转到-20℃约60min，再存于-80℃约24～48h，最终置于液氮中长期保存。

注意：在液氮罐存取细胞样品时要注意防护，以免冻伤。放细胞时最好带布手套防护，打开液氮罐时头应偏向一边防护脸；加液氮时要全面防护好眼、手、脚等身体暴露部位；打开液氮罐时要慢，防止液氮突然汽化太多喷出。