实验三 蟾蜍红细胞内DNA和RNA的显示与观察
【目的要求】
（1）熟悉光学显微镜的使用方法。
（3）了解DNA和RNA在细胞内的分布。
（4）了解细胞化学实验的基本原理。
【标本、试剂和器材】
（1）显微镜、载玻片、盖玻片、解剖剪、解剖镊、解剖针、滴管、擦镜纸、吸水纸、香柏油。
（2）改良石炭酸品红染液、2%碘液。
（3）蟾蜍、70%乙醇、染色缸、丙酮、甲基哌罗宁混合染液。
【实验原理】
利用化学试剂与细胞中的某些物质结合，产生有色沉淀，来确定细胞中某些化学成分的分布，是细胞化学实验的基本原理。由于DNA和RNA两种核酸的聚合程度不同（DNA分子比RNA分子聚合程度高），在用两种特异性染料甲基绿哌罗宁染液混合时，两者发生竞争，DNA与甲基绿结合被染成绿色，RNA与哌罗宁结合被染成红色，据此反应特点，就能立即使细胞中的两种核酸从形态反面区别开来。
【实验内容和步骤】
（1）取一只活大蟾蜍，处死。打开蟾蜍胸腔，剪开心脏，取一小滴血于载玻片的一端，另取一张载玻片的一端边缘浸在血滴内待血沿边缘展开后，以45。角均匀用力迅速地向前推，使血液在载玻片上形成均匀的薄层血膜。晾干，置于显微镜下观察，可见蟾蜍血细胞呈椭圆形，细胞质呈浅红色，细胞核呈椭圆形（图3-3-1）。
图3-3-1 蟾蜍血涂片（示血细胞）
（2）另外制作一张血涂片，在70%乙醇中固定5～10分钟。
染色：待血涂片干后，滴数滴甲基绿哌罗宁混合染液与涂片上，染色20分钟，再用蒸馏水或自来水洗去多余的染液，用吸水纸吸去涂片上多余的水分，但血膜处不可吸得过干。
分化：将涂片在纯丙酮中进行分化约2分钟即可观察。(https://www.daowen.com)
镜下观察：用高倍镜进行观察，可见到血细胞中的核仁和细胞质被染成红色：细胞核被染成蓝绿色。
［附］试剂配制
甲基绿哌罗宁混合染液
（1）0.2 mol/L醋酸缓冲液（pH4.8）
冰醋酸1.2 ml，加蒸馏水至100 ml。
醋酸钠（NaAc、3H2O）2.72 g，溶于100 ml蒸馏水中。
使用时两液按2∶3比例混合。
（2）2%甲基绿染液
甲基绿（Methyl Green）2 g
0.2 mol/L醋酸缓冲液（pH4.8）100 ml
注：甲基绿粉中往往混有影响染色效果的甲基紫，它们必须预先除去，其方法是将配置溶液用分液漏斗加等量氯仿洗数次，静置一夜，置4℃冰箱保存备用。
（3）1%哌罗宁染液
哌罗宁（吡罗红G，或焦宁G，pyronic G进口分装）1g
0.2 mol/L醋酸缓冲液（pH4.8）100 ml
临用时将2%甲基绿和1%哌罗宁液按5：2比例混合，即为甲基绿哌罗宁混合染液。
【实验报告】
绘制蟾蜍血细胞DNA和RNA显示并注明各部分名称。