实验一 显微镜的使用方法和细胞的基本结构
【目的要求】
（1）掌握光学显微镜的主要结构和功能。
（2）掌握低倍镜、高倍镜和油镜的使用方法，做到操作迅速而准确。
（3）熟悉光学显微镜的保护方法。
（4）熟悉光镜下细胞的基本结构及几种细胞器的形态。
【标本、试剂和器材】
（1）显微镜、载玻片、盖玻片、解剖剪、解剖镊、解剖针、牙签、滴管、擦镜纸、吸水纸、香柏油。
（2）高尔基体（兔脊神经节）切片标本、线粒体（小白鼠肠上皮细胞）标本、中心体（马蛔虫子宫横切）玻片标本等。
【实验内容和步骤】
（一）显微镜的结构和使用方法
1.显微镜的结构 光学显微镜的结构分为三部分：机械部分、光学部分和照明部分（图3-1-1）。
图3-1-1 显微镜结构
（1）机械部分
1）镜座（base）：位于显微镜基座，略为方形，用以稳定和支持整个显微镜。
2）镜柱（pillar）：是镜座向上垂直的短柱，联系着镜座和镜臂。
3）镜臂（stand）：连接镜柱，便于手握的弓形结构。
4）调焦器（adjustment）：位于镜柱下方两侧，呈同心圆排列，有大小两种螺旋，一般顺时针旋转时镜台下降，逆时针旋转时镜台上升，借助镜台的升降以调节焦距。大螺旋为粗调焦器（coarse adjustment knob），转动时可使镜台作较大距离和较快地升降，通常在使用低倍镜时用它迅速找到物象；小螺旋为细调焦器（fine adjustment knob），转动时可使镜台缓慢地升降，一般是在调节高倍镜和油镜或分辨物象清晰度时使用。
5）镜筒（cylinder）：位于镜臂上方的圆筒，上端装有目镜，下端装有物镜转换器。安装目镜的镜筒有单筒型（monocular）和双筒型（binocular）两种。
6）物镜转换器（revolving nosepiece）：物镜转换器是一个凹形的圆盘。斜装在镜筒下端，其下面有3～4个物镜孔，可以安装放大倍数不同的物镜。旋转物镜转换器时，即可更换物镜。
7）镜台（stage）：镜台位于镜臂前方，为一方形的平台，是玻片标本安装处。台中央有一通光孔，用以通过光线。镜台上装有标本推动器，可固定并推动载玻片，在镜台下方一侧有两个螺旋，转动时可分别使载玻片前后左右移动。
（2）光学部分
1）目镜（eyepiece）：直接插入镜筒上端。一般备有放大倍数不同的2～4个，上面刻有5×、10×、15×等符号，表示其放大倍数。可以根据需要更换使用。有的目镜中有一个指针，用以指示视野中标本的某一部分。
2）物镜（objective）：装在物镜转换器上。一般分低倍镜、高倍镜、油镜三种。低倍镜镜筒最短，镜孔的直径最大，上面刻有放大倍数4×或10×；高倍镜镜筒较长，镜孔直径较小，放大倍数为40×、45×或60×；油镜最长，镜孔直径最小，放大倍数为90×或100×。有些显微镜的物镜上还刻有镜口率，以EA示之10×物镜的EA为0.25，40×物镜的EA为0.65，100×物镜的EA为1.25oil，其数字越大，放大倍数越大。
显微镜放大倍数的计算方法：目镜放大倍数×物镜放大倍数。例如，所使用的目镜是10，物镜是10，则放大倍数为100倍。
（3）照明部分
1）聚光器（condenser）：聚光器位于镜台的下面，有一或数块透镜组成，其作用是把反光镜射来的光线聚集，并从通光孔照射到载玻片上的标本。
2）光圈（diaphragm）：位于聚光器的下方，系由十余片金属薄片组成，其外侧有一小柄，移动小柄可以开大或关小光圈，以调节光量。
3）反光镜（mirror）：反光镜位于聚光器的下方，安装在镜柱的前方，可以向各个方向转动，使从各个方向来的光线反射入聚光器。反光镜的一面为平面镜，一面为凹面镜，凹面镜有聚光作用，适于光线较弱时使用。平面镜只有反射作用，适于光线较强时使用。
2.显微镜的使用方法
（1）低倍镜的使用方法
1）取用显微镜：打开镜盒，用右手握镜臂，左手托镜座，将显微镜取出轻放在实验桌上自己身体的左前方，镜臂朝向自己，以镜座后端距桌面边缘有3～5 cm为宜。
2）光源：显微镜有不带光源和带光源两类。前者用自然光源和人工光源调节；后者为电光源照明，电光源灯一般装在镜座里，可以使用镜座侧面的电压调节器调节光源强度。
3）对光：先旋转粗调节器，将镜台略略升高，再旋转物镜转换器，使低倍镜正对载物台中央的通光孔（注意，此时物镜转换器与固定卡相碰而发出轻微的振动声音），同时感到有阻力，表示物镜已到位。将聚光器上升，开大光圈。用左眼对准目镜（同时右眼亦张开），用手转动反光镜对向光源取光，达到目镜视野内明亮均匀为止。
4）安放载玻片：取玻片标本，先用肉眼认清标本在载玻片上的位置、正反面和标签，然后将有标本的一面向上，将玻片平放于镜台上，用标本推动器将玻片固定，然后使要观察的部分正对通光孔之中央。(https://www.daowen.com)
5）调节焦距（调焦）：先从显微镜的侧面注视低倍镜，同时转动粗调焦器，使低倍镜镜头距玻片约0.5 cm为止。然后用左眼从目镜中观察，慢慢转动粗调节器，直到出现物象。若物像不大清晰，再用细调节器调节，使物象更为清晰。
6）玻片标本与光圈的调节：如果物像不在视野中央时，可利用推动器将玻片前后左右移动调至中央，注意玻片移动方向与物像移动方向相反。反复练习可使动作随心自如；如果光线太强或太弱可将光圈慢慢关小或开大，也可调节聚光器手轮，达到合适的光度。
（2）高倍镜的使用方法：高倍镜的使用必须在调好低倍镜的基础上进行。
1）用低倍镜找到物象后，将其中要用高倍镜放大观察的部分移动到视野中央。
2）从显微镜的侧面注视，转换高倍镜。
3）从目镜中观察，可见视野中有不太清晰的物像。调节细调节器，即可得到清晰物像。注意，使用高倍镜时，不能随意旋转粗调节器，以免镜台上升幅度太大而损坏玻片或镜头。使用高倍镜所需光度比低倍镜要强，试调节光圈。如果在高倍镜下调节没有观察到物象时，则应从低倍镜重作。
（3）油镜的使用方法：油镜的使用必须在调好高倍镜的基础上进行。
1）将拟用油镜观察的部分，移动到视野中央，旋转物镜转换器，使高倍镜转开，眼睛注视侧面，直接滴上少许香柏油在所观察标本的部位，转换油镜，这时油镜镜头已浸入油中，将光圈完全打开。从目镜中观察，并转动细调节器直到视野出现清晰物像为止。
2）观察完毕后，必须用拭镜纸蘸二甲苯少许，将镜头和载玻片上的香柏油轻轻擦净，无盖玻片的标本（如血涂片等），不能擦拭，以免损坏标本。临时制片因有水分，不能使用油镜。
3.使用显微镜的注意事项
1）拿用显微镜时，必须用一手握镜臂，一手托镜座，紧贴前胸，切勿单手提取，以免零件脱落（特别是目镜易滑落）。
2）不要随意取出目镜，以防灰尘入镜筒，禁止拆卸零件，以防损坏。
3）显微镜清洁。光学部分如有不洁，可用拭镜纸擦拭，切不可用手帕、手指或其他纸张擦拭，以免损坏玻面；其他部分如有灰尘，可用绸布擦净。
4）使用显微镜时，必须两眼睁开，两手并用，边观察、边记录和绘图等。
5）显微镜使用后，先将镜台下降，取下玻片标本，放回原处。旋转转换器，使每一个物镜都不对着通光孔，再上升镜台，使镜头固定在镜台上，将反光镜镜面竖直。最后将各部分擦净，检查零件有无缺损，然后放还镜箱内。
（二）细胞和细胞器观察
1.高尔基复合体的观察 取家兔脊神经节切片，置于低倍镜下观察。可见许多淡黄色椭圆形或不规则的神经细胞。在高倍镜下可见细胞中央几乎无色的圆形细胞核，有的核内可见染成淡黄色的核仁，在细胞核的周围细胞质中有许多染成深褐色呈弯曲的线状、颗粒状和网状的结构，这就是高尔基复合体（图3-1-2）。
图3-1-2 兔脊神经节细胞（示高尔基体）
2.线粒体的观察 取小白鼠十二指肠横切片，置于低倍镜下观察，可见许多皱襞。换高倍镜观察，可见上皮细胞呈柱状，细胞界限不很清晰。换油镜观察，细胞核位于细胞的中央，在细胞的两端有蓝色的线状或颗粒状结构，这就是线粒体（图3-1-3）。
图3-1-3 小鼠十二指肠上皮细胞（示线粒体）
3.中心体的观察 取马蛔虫（Parascaris equorum）子宫横切片，在低倍镜下寻找其受精卵分裂期的细胞，然后换成高倍镜观察，可见分裂中期细胞两极各有一颗深蓝色的圆形小粒，为中心粒。在中心粒周围的明亮区，为中心球。在中心球周围隐约可见许多纤细的、辐射状分布的星射线。中心粒和中心球，合称中心体（central body）（图3-1-4）。
图3-1-4 马蛔虫受精卵（示中心体）
（三）生物学作图要求和方法
（1）生物学作图前应仔细观察标本，严格要求依照实物绘制，不能随意增添、减少。但可根据标本的大小予以适当放大或缩小，但图中各构造的大小应与实物成比例。不能抄袭书上或他人的图。
（2）生物学作图以点线为主，画图时一般将报告纸放在显微镜右侧，两眼睁开，左眼观察标本，右眼看纸画图，先用铅笔在纸上轻轻勾出结构的轮廓，然后逐渐加以修正再用点、线正式绘出，用点之疏密表示明暗，不能涂阴影。注意加点时铅笔要求竖直点。
（3）图作好后必须标注。画图位置一般偏向纸的左侧，右侧用尺子引出直线，并将其名称注于直线的末端，一般应横列而不直写，所画之线最好与图画纸上下边缘平行，切忌互相交叉。
［附］人口腔黏膜上皮细胞标本的制备及观察
（1）取载玻片、盖玻片各一张，擦拭干净，取消毒牙签1根轻轻刮取口腔颊部上皮细胞少许涂抹在载玻片中央，滴一滴2%碘液染色，盖上盖玻片，然后用吸水纸吸取多余的染液，置于低倍镜下观察。
（2）可见呈不规则形状的细胞，在高倍镜观察，在细胞中央有一卵圆形的细胞核，细胞膜极薄，细胞质均匀一致（图3-1-5）。
图3-1-5 人口腔黏膜上皮细胞
【实验报告】
在显微镜图上，注明其结构名称。