实验十一　人类性染色质检测

实验十一　人类性染色质检测

【实验目的】

（1）掌握X染色质标本的制备方法。

（2）熟悉X染色质的形态特征和计数方法。

（3）了解Y染色质的形态特征及制备方法。

（4）熟悉性染色质检查的临床意义。

【实验用品】

1.仪器 显微镜、水浴箱、载玻片、盖玻片、牙签、烧杯、镊子、蒸馏水、拭镜纸、吸水纸、染色缸、记号笔。

2.标本 人口腔黏膜上皮细胞。

3.试剂 95%乙醇、5 mol/L HCl、Mcllvaine缓冲液（pH5.6）、硫堇染液、甲醇、0.005%氮芥喹吖因。

【实验原理】

性染色质是在间期细胞核中染色体的异染色质部分显示出来的一种特殊结构。人类性染色体有X和Y两种，所以性染色质也有X染色质和Y染色质。

（一）X染色质

根据Lyon假说，人类间期细胞的X染色质只有一条有转录活性，当多于一条时，其多余的X染色质将形成异固缩染色质块（X小体）存在于细胞核的边缘，经过染色处理，可在显微镜下看到这一结构。正常女性体细胞中有两条X染色体在间期只有一条有活性，另一条失活呈异固缩状态，即形成Barr小体，又称X染色质或X小体。X染色质大多位于核膜内侧缘，1μm左右，深染。正常女性间期细胞中，X染色质阳性检出率为20%～70%，大多数为30%～50%，高时可达70%以上，男性细胞中则平均低于1%。可采取口腔黏膜细胞，绒毛细胞，羊水细胞等进行检查。

（二）Y染色质

男性间期细胞用荧光染料染色时，可以看到细胞核中有一个大小0.3 μm左右圆形或卵圆形的强荧光小体，称之为Y染色质或Y小体。在正常男性一个细胞中可检测到1个Y染色质，一般阳性涂片中检出率应达细胞数的25%～50%。正常女性细胞中不存在。

在临床上，X染色质和Y染色质的检测是性染色体数目异常患者的辅助诊断手段。

【实验步骤】

（一）X染色质的制备和观察

1.取材 受检女性用清水漱口3次，将口腔内杂物漱出。然后用牙签的钝面刮取口腔颊部黏膜上皮细胞。

2.涂片 将刮取的上皮细胞，均匀涂在洁净的载玻片上，并用记号笔标上记号，以识别标本正反面。(https://www.daowen.com)

3.固定 将涂片置入95%乙醇溶液内固定20～30分钟，用蒸馏水洗3次，取出晾干。

4.染色 将固定后的标本浸入蒸馏水中片刻，再浸入30℃的5 mol/L的HCL溶液中水解20分钟，取出用蒸馏水洗3次（换水）。待干后加入硫堇染液染色30分钟。再用蒸馏水漂洗3次，稍干后盖上盖玻片，用手指轻轻压，用吸水纸吸去盖玻片周围的余液。

5.镜检 在低倍镜下，可见口腔上皮细胞核为圆形或卵圆形，染成紫蓝色，胞质不着色。换油镜，选择典型的可计数细胞进一步观察。在可计数细胞内，仔细寻找X染色质。X染色质的特征是：染色深，轮廓清晰，呈平凸形、圆形、扁平形或三角形，大小约1.5 μm，多位于核膜内侧缘。统计X染色质的阳性率（至少应观察100个细胞）。

（二）Y染色质的制备和观察

1.取材 涂片同X染色质的制备（男性受检）。

2.固定 将涂片在甲醇中固定30～50分钟，取出后用蒸馏水洗3次（换水）。

3.染色 在0.005%氮芥喹吖因中染色5～10分钟。用自来水冲洗3分钟，再用Mcllvaine缓冲液（pH 5.6）冲洗，洗去染液、分色。在标本上滴2～3滴Mcllvaine缓冲液（pH5.6），然后加盖玻片并用吸水纸吸去多余的缓冲液。

4.镜检 静置30分钟后，用荧光显微镜观察。低倍镜下，可见散在的口腔上皮细胞，核染成黄色；换油镜寻找Y染色质。Y染色质的特征是：黄色荧光亮点直径约为0.3 μm，可位于核膜内缘，也可位于核中央。统计Y染色质的阳性率（至少应观察100个细胞）。

【实验报告】

（1）观察100个可数细胞，计算X染色质或Y染色质检出率。

（2）绘制你所观察到典型的X染色质或Y染色质的形态特征和在细胞中的分布状况。

［附］

1.蟾蜍骨骼结构

图3-11-1　蟾蜍骨骼结构

2.小鼠骨骼结构

图3-11-2　小鼠骨骼结构

1.背肋；2.胸椎；3.颈椎；4.顶间骨；5.顶骨；6.额骨；7.鼻骨；8.锁骨；9.肩胛骨；10.肱骨；11.髌骨；12.腰椎；13.荐椎；14.尾椎；15.坐骨；16.髂骨；17.股骨；18.腓骨；19.胫骨；20.跖骨；21.趾骨；22.胸肋；23.头骨；24.指骨；25.桡骨