1.16.3　沉淀蛋白

1.16.3.1　沉淀Flag

加入裂解液（25mmol/L Tris·HCl pH 7.6，150mmol/L NaCl，1% NP-40，1% sodium deoxycholate，0.1% SDS，2mmol/L Na3VO4，50mmol/L NaF，4mmol/L Na Pyrophosphate，25μl protein inhibitor），裂解5min，随后超声2s×10次。离心16000rpm×10min，去除沉淀；将提取的蛋白加入预先准备好的Beads（清洗Beads：吸取40μl Sigma公司的anti-FLAG M2 affinity Gel（A2220），4000rpm×2min离心，加入0.5ml TBS清洗两次），4℃摇过夜。(https://www.daowen.com)

1.16.3.2　沉淀GFP及Myc

加入裂解液[（Nten buffer：100mmol/L Nacl，20mmol/L Tris-Cl，0.5mmol/L EDTA，0.5% NP-40）加入1% sodium deoxycholate，0.1% SDS，2mmol/L Na3VO4，50mmol/L NaF，4mmol/L Na Pyrophosphate，25μl protein inhibitor/ml]，裂解5min，超声2s×10次。离心16000rpm×10min，弃沉淀。加入10μl抗体[anti-c-Myc antibody（9E10，Santa Cruz，SC-40）and mouse monoclonal anti-GFP antibody（Santa Cruz，sc-53882，USA），mouse monoclonal anti-IgG antibody（abcam，ab18413，USA）]，4℃摇3h。加入预先准备好的Beads（吸取60μl protein A/G，4000rpm×2min离心，加入0.5mlNTEN buffer清洗两次，加入裂解的蛋白），4℃摇过夜。