1.16.1　细胞转染

使用Invitrogen公司的Neon Transfect system进行转染，对数期生长的细胞，用10ml的PBS清洗，加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶，在含有5%CO2的细胞培养箱中放置5min，使胰酶发挥作用。加入1ml完全培养基终止胰酶消化，轻轻吹打细胞，使得贴壁细胞全部脱离盘底，转移至15ml离心管。加10mlPBS清洗盘底，转移至15ml离心管，2000rpm×2min，弃上清液。加入10mlPBS，轻轻吹打，离心2000rpm×2min，弃上清液。加入10mlPBS，细胞计数后，离心，按照以下体系进行转染。

各个质粒转染所需要的质粒量（10cm盘，总质粒量为20μg）：

Myc-RND3和Flag-NICD共转染需15μg Myc-RND3与5μg Flag-NICD；(https://www.daowen.com)

GFP-RND3和Myc-CSL共 转 染 需15μg GFP-RND3与5μg Myc-CSL；

GFP-RND3和Flag-Maml1共转染需15μg GFP-RND3与5μg Flag-Maml1。

转染方法：将质粒与300μlMedia R，4×106细胞混匀后电击转染，立即加入预热的完全培养基中，放入含有5%CO2的细胞培养箱内培养36h。