实验二 实验性失血性休克
【实验目的】
（1）掌握失血性休克动物模型的复制方法。
（2）掌握休克不同时期机体的表现和微循环变化特点。
（3）熟悉失血性休克的病因和发病机制，并优化救治方案。
【实验对象及材料】
（1）实验动物：家兔（普通级，雄性，1.8～2.2 kg），术前禁食。
（2）实验材料：婴儿秤，家兔固定盒，家兔手术台，BL-420生物机能实验系统，家兔手术器械1套，静脉输液装置，动脉插管，动脉夹，三通管，气管插管，注射器，培养皿，烧杯，粗棉线，细丝线，纱布，微循环观测分析系统（或体式显微镜），持针器，皮肤缝合针和线。
（3）实验试剂：20%乌拉坦溶液，1%盐酸普鲁卡因，1%肝素生理盐水，1%去甲肾上腺素（1 ml/2 mg），生理盐水。
【实验步骤和检测指标】
（1）术前准备
1）抓取与称重：以右手抓住家兔项背部的皮毛，轻提动物，然后用左手托住其臀部，使兔的重量主要落于左手上。用婴儿秤称重。
2）麻醉与固定：用头皮针从耳缘静脉缓慢推注20%乌拉坦溶液（5 ml/kg）进行全身麻醉。麻醉剂注入后血管颜色由红变白，提示注入麻醉剂成功。当皮肤夹捏反应消失，头颈及四肢肌肉松弛，呼吸规则且平稳，角膜反射迟钝，即停止麻醉。耳缘静脉留针，连接静脉输液装置，缓慢滴注生理盐水（10～15滴/分），保持静脉通畅。
家兔仰卧位固定于兔手术台上，手术部位（颈部和腹部）剪毛、备皮。
（2）颈部手术
1）气管分离和插管：颈部正中做长约6 cm的纵切口，钝性分离皮下组织和肌肉。用止血钳分离气管，穿粗棉线备用。甲状软骨下缘1 cm处，气管软骨环之间，用直剪在气管壁上做“⊥”形切口，插入气管插管，结扎并固定。
2）左侧颈总动脉的分离和插管：在气管左侧深部找到颈动脉鞘，触之有明显搏动感。用玻璃分针仔细分离出2～3 cm左侧颈总动脉（注意：不要损伤迷走神经），穿双细丝线备用。先结扎颈总动脉远心端，再用动脉夹夹闭其近心端；用镊柄部从血管背后轻扶血管，眼科剪在血管壁上剪“V”形切口，将充满肝素的动脉插管朝向心脏方向插入动脉内，扎紧并固定，松开动脉夹，左颈总动脉插管通过三通开关连接压力传感器，记录动脉血压的数值。插管前，家兔耳缘静脉注射1%肝素（0.5 ml/kg），以防血液凝固。
（3）腹部手术：肠系膜微循环观察：剑突下2 cm处做腹正中皮肤切口4～5 cm，沿腹白线剪开腹膜，沿盲肠系膜轻柔地将一段游离度较大的小肠肠系膜拉出腹外（找盲肠时切忌用力牵拉，以免肠系膜血管收缩，血流停止）。用止血钳夹住腹部切口，以防肠管外溢。将兔向右侧卧位固定，使肠系膜均匀平铺，置于微循环装置的观察范围内。找到肠系膜的毛细血管（仅能通过一个红细胞的微血管），显微镜下观察放血前、后肠系膜微循环的血流状态的变化。注意微动脉与微静脉区域内的毛细血管开放数目及血流速度，血流速度可用线流（最快）、线粒流（较快）、粒流（较慢）、泥沙流（慢）及血流停滞来描述。观察过程中滴加生理盐水保持肠系膜的湿润。
（4）复制失血性休克模型
1）动物稳定10 min后，记录正常状态下（放血前）的各项检测指标。(https://www.daowen.com)
2）由颈总动脉插管的三通开关处放血，使血液流入100 ml烧杯（肝素化）内，每放血10 ml即关闭开关，检测指标的变化。若血压有回升，可以继续少量放血，使血压维持于40 mmHg左右（维持10 min左右），即可造成失血性休克模型，记录失血量和各项指标的变化。注意：停止放血后，三通管接通压力感受器才能正确测得动脉血压。同时，不可以一次放血过多造成动物死亡。
（5）抢救及伤口缝合
1）静脉回输血液。将回收的血液缓慢经耳缘静脉全部回输，观察并记录动脉血压和微循环的变化，判断救治措施是否有效。
2）单纯扩容。耳缘静脉滴注生理盐水（40～60滴/分），每输液40 ml观察并记录动脉血压和微循环的变化，判断救治措施是否有效。
3）缩血管药物的应用。耳缘静脉缓注1%去甲肾上腺素（1 ml/kg），观察并记录微循环和动脉血压的变化，判断救治措施是否有效。
4）皮肤伤口缝合。
5）根据实验室条件，自行设计并实施抢救方案，并判断救治措施是否有效。
（6）检测指标：动物的耳廓和眼睑血管颜色，皮温，呼吸，心率，血压（脉压差），肠系膜微循环（毛细血管数目和流速等），尿量和尿pH等的变化。
（7）实验结束后，家兔用空气栓塞法处死。
【注意事项】
（1）术中动物如有挣扎，可以注射1%普鲁卡因局麻。
（2）少量出血用纱布压迫止血；较大出血点用止血钳夹闭血管后结扎止血。
（3）插管前，三通管、导管、注射器和家兔都要肝素化，以防血液凝固。
（4）动脉插管容易滑脱，故要结扎和固定牢靠。
【实验结果】
【实验讨论】
（1）请结合失血性休克的微循环障碍机制，讨论不同失血量对家兔的血压、呼吸、心率和微循环变化的影响有哪些？
（2）失血性休克造模成功的标准是什么？
（3）你们选用的治疗方案是否有效？请进一步完善失血性休克的治疗方案。