已知基因的克隆策略

从技术层面来说，获取目的基因的常用策略有：从基因文库中筛选获取，利用PCR技术从含有目的基因的模板DNA中扩增，根据已知的基因序列人工合成等。因此，基因的克隆要根据实验的基础、目的和条件来选择策略。

①已知目的基因的全部DNA或cDNA序列，可以人工合成全长的DNA序列，为了节约成本和时间，更多是采用PCR或RT-PCR方法来克隆。不含内含子的基因可直接设计相应的引物，提取目的基因的总DNA进行PCR扩增；对含有内含子的真核基因，需要利用RTPCR，提取总RNA，然后进行RT-PCR扩增，也可以合成探针筛选cDNA文库。

②已经知道其他物种的同源基因序列，如果基因同源性较高（95%以上），可以直接设计PCR引物（或者兼并引物）来扩增目的基因，也可以根据同源保守区设计引物或者兼并引物，然后利用PCR克隆目的基因的保守区，再利用染色体步移技术获得全长基因；对同源性较低（低于40%）的基因可以根据其最保守区域设计探针，进行文库筛选来克隆该基因。

③已知目的基因的部分DNA、cDNA或EST序列，可以采用反向PCR技术，锅柄PCR技术等染色体步移技术来获得完整全长的基因序列。已知部分cDNA序列的真核基因可以采用快速末端扩增技术（RACE）来获得完整的基因，也可以利用已知序列作为探针来筛选基因文库或cDNA文库以获得全长基因序列。

④已知目的基因表达蛋白的氨基酸序列，可以根据蛋白质序列推导DNA序列，然后进行人工合成全长基因；也可以根据蛋白质序列设计兼并引物PCR扩增目的基因；还可以设计探针筛选基因文库或cDNA文库。