1.3　方法

1.3　方法

1.3.1 虫草素的测定方法

采用高效液相色谱法测定虫草素，色谱条件：色谱柱Shim-pack vp-ODS(150mm×4.6mm，5μm)；流动相为甲醇水(15∶85，V/V)；流速1mL/min；进样量10μL；检测波长260nm；柱温40℃。

虫草素标准液的配制及线性关系考察：精确称取虫草素标准品2mg，用甲醇溶解并定容至10mL，配制成0.2mg/mL标准储备液。分别准确量取上述储备液用甲醇稀释定容至质量浓度10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL、100μg/mL的标准溶液，以质量浓度为横坐标、峰面积为纵坐标，得线性回归方程：y=0.0009x+0.01，R2=0.9998。

1.3.2 蛹虫草固体培养基样品溶液的制备

称取干燥固体培养基干粉500g，以蒸馏水作溶剂，固液比1∶30，70℃水浴提取2h，过滤，滤渣重复提取一次后过滤，合并滤液、浓缩、离心，取上清液备用。

1.3.3 树脂的预处理［15］

大孔吸附树脂用无水乙醇浸泡24h，抽滤、醇洗，直至洗出液加水不混浊，然后用水反复洗涤至无醇味。用2BV质量分数5%盐酸浸泡2h后水洗至近中性，再用2BV质量分数2%氢氧化钠溶液浸泡2h，用一定体积蒸馏水洗至中性，过滤，用蒸馏水浸泡备用。

1.3.4 不同树脂静态吸附与解吸效果的比较

分别取预处理好的湿树脂10mL置于250m L具塞磨口三角瓶中，加入虫草素质量浓度0.50mg/mL的蛹虫草固体培养基提取浓缩液100mL，置于摇床振摇，24h后取出，过滤，测定滤液中虫草素的质量浓度。

将上述吸附饱和的树脂过滤后吸干表面的水分，各加入200mL 25%乙醇溶液解吸，置于摇床振摇24h后取出，过滤，测定滤液中虫草素的质量浓度。根据下列公式计算各种树脂的吸附量和解吸率。

1.3.5 样品溶液质量浓度对树脂吸附的影响(https://www.daowen.com)

分别取6组预处理好的HPD 100树脂10mL置于250mL具塞磨口三角瓶中，加入不同虫草素质量浓度(0.21mg/mL、0.42mg/mL、0.62mg/mL、0.85mg/mL、0.97mg/mL、1.14mg/mL)蛹虫草固体培养基提取浓缩液100mL，用玻璃纸封口，置于摇床振摇，24h后取出，过滤，测定滤液中虫草素的质量浓度。

1.3.6 HPD-100树脂的静态吸附动力学曲线

准确量取预处理好的HPD-100树脂10mL，置于250mL具塞锥形瓶中，加入虫草素质量浓度0.60mg/mL的固体培养基提取浓缩液100mL，恒温振摇，每隔20min吸取0.2mL上清液检测虫草素质量浓度，直至吸附饱和。确定虫草素被吸附量随时间变化的关系，绘制静态吸附动力学曲线。

1.3.7 解吸溶剂的选择

取5份HPD-00树脂10mL，分别置于250mL具塞锥形瓶中，各加入虫草素质量浓度0.60mg/mL的样品溶液100mL，恒温振摇，充分吸附2h，取出后过滤，滤液留样检测虫草素质量浓度，根据式(1)计算树脂吸附量。

取吸附饱和的树脂，吸干表面残留的溶液，分别加入200mL不同体积分数(0、25%、50%、75%、95%)乙醇溶液解吸，置于摇床中振摇24h，取出过滤，取滤液检测虫草素质量浓度，根据式(2)计算解吸率。

1.3.8 上样量考察

取质量浓度0.60mg/m L的固体培养基提取浓缩液，以2BV/h的流速上样到装柱体积20mL的树脂柱，分段接收流出液，测定流出液中虫草素质量浓度，考察随上样体积的增大流出液中虫草素的泄漏情况，制作动态吸附曲线，确定最大上样量。

1.3.9 动态吸附与解吸工艺优选

取质量浓度0.60mg/mL的固体培养基提取浓缩液，以不同的流速(1BV/h、2BV/h、3BV/h、4BV/h)上样到装柱体积为20mL的树脂柱，分段收集流出液，检测流出液中的虫草素质量浓度，考察上样流速对树脂吸附的影响。

对吸附饱和的树脂柱，用25%乙醇溶液以不同流速(1BV/h、2BV/h、3BV/h、4BV/h)进行解吸，分段收集解吸液，测定虫草素质量浓度，计算解吸率，确定最佳解吸体积和解吸速率。