牛分枝杆菌(M.bovis)
牛分枝杆菌可引起温血动物如牛、狗、猫、猪、鹦鹉、獾、鹿、骆驼、一些鸟类和人在内的类结核病。在19 世纪后期,发达国家25%的人结核病由牛分枝杆菌引起。该菌的细胞免疫和体液免疫存在分离现象。迟发性变态反应常常被用于检测动物是否感染。
1.形态染色
菌体较短而粗,稍弯曲,有时分枝呈丝状,单在、少数成丛,大小为(0.2~0.5)µm×(1.5~4.0)µm。不产生鞭毛、芽孢或荚膜。革兰染色阳性。
本菌与一般革兰阳性菌不同,其细胞壁不仅有肽聚糖,还有特殊的糖脂。由于糖脂的作用,革兰染色不易着色。常用的抗酸染色法是齐尼二氏(Ziehl-Neelson)染色法,细菌被染成红色(图10-1-1)。
图10-1-1 牛结核杆菌抗酸染色
2.培养特性
牛分枝杆菌属于专性需氧菌。对营养要求严格,5%~10% CO2可促进其生长。最适pH为 6.4~7.0。最适生长温度为37~37.5℃,低于30℃或高于42℃均不生长。
牛分枝杆菌生长缓慢,培养期较长。因此,接种样品的固体培养基需用封口膜封住,防止培养基干燥。37℃培养4~6 周后检查结果。常用的培养基有罗杰(Lowenstein-Jensen)培养基、改良罗杰培养基、丙酸酮培养基等。牛分枝杆菌在固体培养基上的菌落呈乳白色或米黄色,隆起,表面粗糙、边缘不整齐,呈颗粒状、结节状或菜花状;在液体培养基表面形成一层有皱褶的菌膜。
3.生化反应(https://www.daowen.com)
牛分枝杆菌与其他结核杆菌一样均不发酵糖类,但能产生触酶,硝酸还原、烟酸试验和烟酰胺酶试验均为阴性,以此可与结核分枝杆菌(人型菌)鉴别。具体见表10-1-1。
表10-1-1 结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、禽分枝杆菌的生化特性
注:引自陆承平主编《兽医微生物学》(第五版)。+,阳性;-,阴性。
4.分离鉴定
(1)牛分枝杆菌分离鉴定流程(图10-1-2):若菌落、菌体染色都不典型,则可能为非典型分枝杆菌,应进一步进行鉴别试验。
(2)分枝杆菌种间鉴别:结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、禽分枝杆菌之间的生化反应有一定差异,利用生化反应的特点可以对其进行鉴别。
图10-1-2 牛分枝杆菌分离鉴定流程
(3)动物试验:将分离纯化的培养物分别接种鸡、豚鼠和兔子,皮下或腹腔注射0.5ml,禽分枝杆菌可使鸡致病,结核杆菌对豚鼠致病性强,牛分枝杆菌对兔子有致病性,一般于接种后3 周至3 个月死亡。