猪痢疾短螺旋体（B.hyodysenteriae）

猪痢疾短螺旋体（B.hyodysenteriae）

猪痢疾短螺旋体引起猪的肠道感染，以大肠黏膜卡他性、出血性和坏死性炎症为特征，导致发病猪黏液性出血性下痢。猪痢疾于1921 年在美国首次发现，但直到1972 年才发现该病的病原为螺旋体，并命名为猪痢疾密螺旋体，1991 年将其命名为猪痢疾蛇形螺旋体，现在统一命名为猪痢疾短螺旋体。

1.形态染色

猪痢疾短螺旋体菌体长6～9µm，直径0.3～0.5µm，多为2～4 个弯曲，两端尖锐，形似双燕翅状［图11-4-1（a）］。在暗视野显微镜下，可见其进行活泼的蛇形运动。菌体表面有鞭毛，这有助于其穿透并向肠壁上皮黏膜进行移动。

猪痢疾短螺旋体革兰染色呈阴性，维多利亚蓝、姬姆萨和银染法均能使其较好着色。在扫描电子显微镜下观察，菌体呈蛇形、弯曲状［图11-4-1（b）］。

2.培养特性

猪痢疾短螺旋体对生长条件和营养要求苛刻，需要严格厌氧条件，一般在一个大气压、80%～95% N2和5%～20%CO2条件下，37～42℃培养5～7 天。培养时通常需要加入10%的胎牛血清或者新鲜血液的胰酪大豆胨液体培养基（TSB）和脑心浸液（BHIB）的液体或固体培养基中才能生长。在血平板上可见强β 溶血环（图11-4-2），呈云雾状生长而无可见菌落。在基础培养基中选择性地加入抗菌药如多黏菌素B、壮观霉素、万古霉素和利福平等，可提高本菌从肠道样品中的分离率。

3.生化反应

本菌能分解葡萄糖、蔗糖、乳糖、果糖、麦芽糖等，产酸不产气，吲哚试验阳性、β-葡萄糖苷酶活性阳性，不水解马尿酸，不液化明胶，不产生硫化氢，细胞色素氧化酶、触酶阴性。

4.分离鉴定

（1）猪痢疾短螺旋体分离鉴定流程（图11-4-3）：取带有血丝的黏液少许或大肠黏膜直接涂片，姬姆萨染色镜检；或将病料涂在载玻片，加水一滴，在相差显微镜或暗视野显微镜下检查。如观察到呈蛇形运动的螺旋体，即可初步确诊。取新鲜病料，划线接种于添加药物的TSB 肉汤或血琼脂平板上，在严格厌氧条件下培养5～7 天。见有明显溶血时，即可取出镜检。对可疑菌落在血琼脂平板上纯化培养，并选择商品化试剂进行生化鉴定和PCR 检测。(https://www.daowen.com)

（2）生化鉴别：挑取溶血菌株进行生化试验，针对螺旋体的溶血性以及能否产生吲哚和水解马尿酸，对螺旋体种类进行鉴别（表11-4-1）。

（3）动物试验：将溶血菌株注射健康家兔，5～10 天后做睾丸穿刺检查看有无猪痢疾短螺旋体存在；也可用10～12 周龄的猪做结肠结扎试验，根据结扎肠段有无特征性变化而予以诊断。

（4）PCR 鉴定：对分离纯化的培养物用煮沸法提取细菌DNA，特异性引物和反应条件如下。

P1：5′-ACTAAAGATCCTGATGTATTTG-3′

P2：5′-CTAATAAACGTCTGCTGC-3′

扩增产物大小：354bp。

PCR 反应程序：94℃预变性5min；94℃变性30s，52℃退火30s，72℃延伸30s，30 个循环；72℃延伸10min。