钩端螺旋体属（Leptospira）
钩端螺旋体属又称为细螺旋体属，其特征是菌体纤细、螺旋致密，一端或两端弯曲呈钩状的螺旋体，简称钩体。该属成员大部分营腐生生活，广泛分布于自然界，尤其存活于各种水生环境中，无致病性；小部分为寄生性和致病性，可引起人和动物的钩端螺旋体病（简称钩体病），是一种人兽共患病。钩端螺旋体病的临床症状复杂，早期极易误诊。实验室菌体培养历时较长，需要7～10 天。随着分子生物学技术的发展，PCR 检测技术已广泛应用于本病的检测中。
1.形态染色
钩端螺旋体是一类菌体细长、弯曲、规则而紧密的单细胞微生物，直径约为0.1µm，长度为6～20µm。钩端螺旋体只能在暗视野或相差显微镜下观察到。钩端螺旋体螺旋一端或两端弯曲呈钩状，常使菌体呈C 形或S形等形状（图11-4-4）。钩端螺旋体运动活泼，在液体环境下，沿着长轴旋转，两端柔软，呈扭动运动。外膜位于原生质和轴丝的外层，相当于细菌荚膜，由多糖、脂类和蛋白质组成，具有良好的抗原性。
图11-4-4 钩端螺旋体（镀银染色）
（引自周庭银主编《临床微生物诊断与图解》）
钩端螺旋体革兰染色阴性，但较难着色。镀银染色法和刚果红负染效果较好。
2.培养特性
钩端螺旋体较易培养，在含有5%～10%兔血清的Korthof 培养基上分离培养。灭活的新鲜兔血清能促进钩端螺旋体的生长并中和培养过程中产生的抑制因子。钩端螺旋体为需氧或微需氧微生物，生长较慢，通常需培养5～10 天，最适温度为28～30℃；培养基以微碱性为好，pH 为7.2～7.4。在Korthof 液体培养基上培养1～2 周，可见半透明云雾状混浊；在半固体培养基上可形成扁平、透明、圆形的菌落。钩端螺旋体对铜离子敏感，即使微量存在，也不易生长。
3.生化反应
不发酵糖类，不分解蛋白质，氧化酶和过氧化氢酶均为阳性。某些菌株能产生溶血素。
4.分离鉴定(https://www.daowen.com)
（1）钩端螺旋体分离鉴定流程（图11-4-5）：采集急性病例的高热期血液、尿液、乳汁、体液或剖检无菌采集肝、肾组织。血液、尿液、乳汁、体液滴加在载玻片上，在暗视野显微镜下检查有无钩端螺旋体。取肝、肾组织在Korthof 液体培养基增菌培养后，姬姆萨染色后钩端螺旋体呈淡红色，镀银染色后钩端螺旋体呈黑色，复红亚甲蓝染色钩端螺旋体呈紫红色。对增菌液接种Korthof 培养基纯化培养，培养物进行动物接种试验和PCR 检测。
图11-4-5 钩端螺旋体分离鉴定流程
（2）动物试验：幼龄豚鼠、黄金地鼠对钩端螺旋体比较敏感，将纯化的培养物接种于豚鼠或黄金地鼠的腹腔内，一般3～7 天发病，取心血镜检。
（3）PCR 检测：参考《钩端螺旋体病诊断标准》（WS290—2008）。特异性引物、反应体系和条件如下。
上游引物（G1）：5′-CTGAATCGCTGTATAAAAGT-3′
下游引物（G2）：5′-GGAAAACAAATGGTCGGAAG-3′
扩增产物大小：285bp。
PCR 反应程序：95℃预变性5min；94℃变性60s，55℃退火60s，72℃延伸90s，35 个循环；72℃延伸10min。