二、方法学评价

二、方法学评价

目前，国内外尚无统一公认的标准化方法。美国胃肠病学学会推荐愈创木酯化学法或免疫法。

1.化学法方法较多，如邻联甲苯胺法、还原酚酞法、联苯胺法、匹拉米洞法、无色孔雀绿法、愈创木酯法等，区别在于使用不同色原性反应底物，其实验设计原理基本相同。

（1）灵敏度

①邻联甲苯胺法：最灵敏，检测出灵敏度可达0.2～1mg/L的血红蛋白。邻联甲苯胺法为1983年中华医学会全国临床检验方法学学术讨论会推荐的方法，但易出现假阳性结果。

②匹拉米洞法：为中度灵敏的试验，可检出1～5mg/L的血红蛋白，消化道有5～10ml出血即为阳性。隐血试验多选用中度灵敏的试验。

③愈创木酯法：可检出血红蛋白6～10mg/L，此时消化道出血可达20ml，灵敏度差，假阳性很少（受食物、药物摄入的影响因素少），特异性较高，如此法为阳性，可确诊消化道出血。

④试带法：目前国内外生产应用四甲基联苯胺和愈创木酯为显色基质检测隐血，虽较为方便，但未能从根本上解决隐血试验方法学中的存在问题（如食物因素的干扰）。

（2）特异性和干扰因素

①动物性食物和生食蔬菜的影响：动物的血、肉中的血红素可使试验呈假阳性；蔬菜、水果具有植物过氧化物酶活性，也可以出现假阳性。

②药物的影响：患者服用大量维生素C或其他具有还原作用的药物，可使试验中的过氧化氢还原，不能再氧化色原物质，使隐血试验呈假阴性。

③细菌分解血红蛋白引起的假阴性：血液如在肠道停留过久，血红蛋白被细菌降解，血红素不复存在，则隐血试验出现假阴性。

④其他因素：由于粪便取材部位不同、标本反应时间不同、检验人员对显色判断标准掌握不同等，故在同一方法的试验中，亦可存在误差。

粪便隐血试验化学法的干扰因素与评价见表3-6。

表3-6　粪便隐血试验化学法的干扰因素与评价(https://www.daowen.com)

2.免疫胶体法　目前，利用免疫学原理检测隐血的方法也较多，方法各有优缺点。采用免疫胶体金技术为主要方法，其方法优点较多。

（1）灵敏度：该法灵敏度高，一般血红蛋白为0.2μg/ml（0.03mg Hb/g粪便）即可阳性，且反应快速。

（2）特异性：免疫法隐血试验不受动物血干扰，如动物血血红蛋白在500mg/L，辣根过氧化物在200mg/L时，对试验也无影响。单克隆抗体隐血试验对人隐血具有高度特异性。用单克隆抗体法检测食用新鲜蔬菜、铁剂、维生素C患者的粪便均为阴性；而愈创木酯法检测则均呈假阳性。

免疫胶体金性质比较稳定，并能呈现颜色，胶体金与单克隆抗体二者结合稳定性好，而且可作为定性和半定量测定试验。其操作简便，判断结果准确。

（3）后带（postzone）现象：为本法的缺点，当患者消化道大量出血时，粪便中的血红蛋白浓度过高时，则抗原抗体比例不合适，抗原（血红蛋白）过剩时，外观明显呈柏油样，而粪便隐血试验却为阴性反应，即假阴性。

（4）假阳性：主要由于灵敏过高造成的。正常生理情况下，胃肠道每日排出血液0.5～1.5ml，大多数＜2ml/24h。服用阿司匹林后可引起消化道出血2～5ml/24h，使用高度敏感的免疫胶体金法检查，可出现阳性结果。

粪便隐血试验免疫法干扰因素与评价见表3-7。

表3-7　粪便隐血试验免疫法的干扰因素与评价

3.其他“隐血”试验方法

（1）转铁蛋白（transferrin，Tf）测定：伴随粪便隐血而具有良好抗原性、却不易降解的蛋白质，如转铁蛋白、肝触珠蛋白、清蛋白等。转铁蛋白测定方法灵敏度可达2mg/L。单独或联合检测粪便中Hb以外的其他血液成分，作为消化道出血的标志较为有效。转铁蛋白具有肠道出血的特异性和抗细菌分解的稳定性。转铁蛋白测定是检测消化道出血的良好指标。联合检测Tf和Hb有助于筛检早期大肠癌。

（2）血红蛋白荧光测定法：采用叶啉荧光定量血红蛋白试验（Hemo-Quant test，HQT），以热草酸为试剂，使血红素变为原叶啉进行荧光检测，除可测定粪便中未降解的血红蛋白外，还可测定血红素衍化物叶啉，从而克服了受血红蛋白降解而影响检测结果的缺点，对上、下消化道出血同样敏感。但仍受外源性血红素、叶啉类物质干扰，且方法较复杂，而未能推广。