1.3.2　动物细胞工程的发展

1）融合现象的发现

19世纪30年代，Muller、Schwann和Virchow等相继在肺结核、天花、水痘、麻疹等病理组织中观察到多核细胞现象。1849年Lobing在骨髓中也发现了多核现象的存在。1855—1858年，科学家们在肺组织和各种正常组织及发尖和坏死部位都发现了多核细胞。1859年，Barli在研究黏虫的生活史时发现，某些黏虫存在着由单个细胞核融合形成多核的原生质团的情况。据此他认为多核细胞是由单个细胞彼此融合而形成的。

2）动物组织细胞培养技术的建立(https://www.daowen.com)

1907年，美国胚胎学家R.Harrison将蛙的胚神经管区一片组织移植到蛙的淋巴液凝块中，首创了体外组织培养法。1912年，Carrel发现了鸡胚浸出液对于某些细胞的生长具有很强的促进效应，还把无菌技术引入了组织培养技术中。作为他的技术标志是，他在不含抗菌素的培养条件下使鸡胚心脏细胞维持生存了34年，先后继代3 400次，证明动物细胞有可能在体外无限地生长。1940年，Earle建立了可以无限传代的一个C3H小鼠的结缔组织细胞系——L系，1951年，开发了能促进动物细胞体外培养的人工培养液，进一步促进了动物细胞培养技术的发展。1958年，Okada发现紫外灭活的仙台病毒可引起艾氏腹水瘤细胞彼此融合。20世纪60年代，Harris诱导不同的动物体细胞融合获得成功并能存活下来。1975年，免疫学家Kohler和Milstein利用仙台病毒诱导绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合，选择到能分泌单一抗体的杂种细胞。该杂种细胞具有在小鼠体内和体外培养条件下大量繁殖的能力，并能长期地分泌单克隆抗体，从而建立了小鼠淋巴细胞杂交瘤技术。这一技术的诞生把细胞融合技术从实验阶段推向了应用研究阶段。

3）动物克隆技术的建立

1891年，Heape等人首次报道了家兔胚胎移植成功的结果，他们把安哥拉家兔胚胎移植给比利时兔，得到了4只安哥拉家兔。20世纪30年代以后，先后在羊、猪、牛等动物的胚胎移植上获得成功。经过几十年的不断完善和充实，已成为一项比较成熟的繁殖生物学技术。1997年，英国科学家Wilmut等在世界权威杂志Nature上首例报道了世界第一只克隆羊的诞生。它的贡献在于：实验证明了哺乳动物高度分化的细胞同样含有全套遗传信息，也能在一定条件下发育成动物个体，进一步证明了动物细胞的全能性。1998年，Thomason成功建立人胚胎干细胞系。