6.5.2　离体授粉方法

6.5.2　离体授粉方法

1）收集花粉

因不同植物而异，在开花前数天套袋，开花前一天或当天取花蕾或花药，表面消毒后，无菌条件下收集花粉。

2）剥取子房或胚珠

做母本的花蕾在开花前数天去雄并套袋，开花前一天取花蕾在实验室进行常规表面消毒之后，在无菌条件下剥取胚珠或子房培养。

3）离体受精方法

（1）子房试管授粉(https://www.daowen.com)

①直接引入法。无菌条件下用锋利刀片将子房壁或子房顶端切开一个小口，把花粉悬浮液直接滴入切口后进行培养。

②注射法。注射法是用无菌注射器吸取花粉悬浮液，从子房基部或上端切口注入子房，基部切口可用凡士林封口，然后接种于培养基上。花粉悬浮液是将收集的无菌花粉用10～20 mg／L浓度硼酸溶液加5%蔗糖配制而成，每滴含花粉100～300粒。

（2）胚珠试管授粉

胚珠剥离后可从胎座上切下单个胚珠授粉，也可将带着完整胎座或部分胎座的胚珠接种到培养基上，并撒播花粉。

①哺育法。哺育法是将胚珠表面先蘸满有助于花粉萌发的培养基，然后撒上花粉后培养。

②接近法。接近法是将花粉预先撒于培养基上培养使之萌发或不萌发，然后接种胚珠或子房培养。例如，芸薹属植物胚珠按上述两种方式授粉，具体做法：将离体胚珠在培养基上浸一下，培养基成分：含0.01%氯化钙、0.01%硼酸、6%蔗糖和4%琼脂，撒上花粉之后接种于含5%蔗糖的Nitsch培养基上；或者将花粉先撒在适于萌发的培养基上（含0.01%氯化钙、0.01%硼酸、2%蔗糖、10%琼脂），再将胚珠或子房在0.1%氯化钙溶液中浸片刻后接种到有花粉的培养基上，24～28 h后，待花粉管进入胚珠后，再将其移入含2%蔗糖的Nitsch培养基上进行培养。