8.1.1 水和平衡盐溶液
1）水
水在动物体细胞中发挥着举足轻重的作用，如物质的运输吸收、酶促反应的媒介、调节温度、维持细胞形态、影响细胞呼吸等，因此水对于体外培养细胞极其重要。体外培养的细胞对水质特别敏感，对水的纯度要求很高。因此，配制培养液用的水必须经过纯化。细胞培养用水必须经过2～3次玻璃器皿蒸馏或者用离子交换树脂处理的水。一般在电导仪上显示为2×106～3×106Ω以上方可使用，生长液要在5×106Ω以上。蒸馏水的贮存对保持水的质量有很大影响；周围环境和空气能使水污染，或改变其pH，所以贮存水的容器要尽量减少开启次数，避免和外界多接触，存放时间不宜过长，一般不要超过两周，最好现制现用。
2）平衡盐溶液
平衡盐溶液（BSS）主要是由无机盐、葡萄糖配制而成，主要作用是维持细胞渗透压平衡，保持pH稳定及提供简单的营养。主要用于取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、配制其他试剂等。
表8.1是几种常用BSS的配方表。Hanks液和Earle液是配制各种培养液最常用的基础溶液，它们的主要区别在于缓冲系统不同。Hanks液缓冲能力较弱，需利用空气平衡；Earle液含有高浓度的NaHCO3，缓冲能力较强，需用5%的二氧化碳平衡。钙、镁离子是细胞膜的重要组成成分，它们有促使细胞凝聚的作用。因而配制离散细胞用的消化液和细胞洗涤液时，宜采用钙、镁离子含量低的Dulbecco液和无钙、镁离子的D-Hanks液，或更为简单的PBS液。
表8.1 常用的平衡盐溶液配方表（g／L）
续表
配好的平衡盐溶液可以过滤除菌或高压灭菌。配液时的注意事项如下：
①需用新鲜的三蒸水或去离子水，按规定的先后顺序配制，称量要准确，要看清药品的规格、纯度、结晶水的数量等，切勿搞错。
②纯度高的物质配制成的溶液质量高，因此在配液选用时要注意。常用的纯度有优级纯（GR）、分析纯（AR）和化学纯（CP）3种类型。
③配制BSS时要注意避免钙、镁离子沉淀，如果配方中含有Ca2+、Mg2+，应当首先单独溶解这些成分。(https://www.daowen.com)
④不少物质性质热不稳定，高温高压下易破坏。如葡萄糖只能在115℃下维持15～20 min，若超温葡萄糖就会被破坏。
⑤贮存液。通常先配制成10倍或100倍的一系列母液，用前临时混合和稀释，过滤除菌备用。
3）其他溶液
（1）pH调节液
①碳酸氢钠液。可根据需要与使用方便配10%以下的各种浓度。先用双蒸水溶解后，需经过滤除菌或高压蒸气灭菌，分装于小瓶中，密封，4℃冰箱保存。
②Hepes缓冲液。Hepes缓冲液是一种可以保持细胞培养过程中pH较长时间稳定的氢离子缓冲剂。可直接购买市售成品按要求配制。
（2）消化液
取材进行原代细胞培养时常常需要将组织块消化解离形成细胞悬液，传代培养时也需要将贴壁细胞从瓶壁上消化下来，常用的消化液有胰酶溶液、胶原酶溶液和EDTA溶液。
（3）双抗溶液
为防止细胞培养过程中发生污染，一般在培养液中加入青霉素钠盐和硫酸链霉素，其浓度分别为每毫升含100 U和100μg。
（4）台盼蓝液
称取台盼蓝0.5 g溶于100 mL磷酸缓冲液中，溶解后过滤即得。主要用于细胞染色。
