【实验方法】

1.将细胞培养在裁成小条的盖玻片上，生长密度达++～+++时取出，用PEMP缓冲液轻轻漂洗细胞。

2.0.5%Triton X-100/PEMP溶液预温到37℃，处理细胞1.5～2 min。Triton X-100是非离子型去污剂，能适当增加细胞膜的通透性使抗体容易进入细胞，也能抽提掉若干杂蛋白使胞质背景清晰。

3.PEMP缓冲液洗细胞2次。

4.3.7%甲醛-PEMD溶液在室温下固定样品30 min。

5.PBS洗2次，用滤纸吸干多余的液体。(https://www.daowen.com)

6.结合一抗。用毛细吸管滴约20μL已经稀释的一抗于载玻片中央，将盖玻片条的细胞面覆于其上，37℃湿盒内温育60 min。

7.取出细胞样品，放35 mm小染色缸内，按PBS→1%Triton X-100/PBS→PBS顺序漂洗细胞，每个环节3～5 min，可以放在振荡器上振荡漂洗。取出盖玻片条，用滤纸吸干液体。

8.结合二抗。用已经稀释的二抗与细胞温育40～60 min（操作步骤同6，洗涤步骤同7）。

9.无离子水洗样品2次，待稍干后滴加甘油-PBS封片，四周涂指甲油封固。样品在4℃暗处可保存数天。