2.3.3　肠类器官的鉴定

如前所述，肠类器官可以通过诱导PSCs分化或从分离的肠干细胞中衍生而来。经典的绒毛-隐窝状结构被认为是小肠类器官成功建立的重要标志，表现出适当的出芽（分支）形态，中间为空腔（图2-4）。在芽的最外侧，可以检测到Lgr5＋干细胞，以及相邻的Lyz1＋潘氏细胞。沿着芽的顶端至中间空腔区域，还能检测到吸收细胞（表达SLC35A1）和杯状细胞（表达MUC2），并且在空腔区域还能检测到由杯状细胞分泌的黏液［15，50］，反映了类器官的分化和成熟水平。人肠道类器官在光学显微镜下应为囊球状或芽体状，外侧为紧密接触的柱状上皮细胞。空腔及与外界交界处的边缘清晰，细胞透亮。人小肠类器官中应检测到碱性磷酸酶及溶菌酶，人大肠类器官中应检测到黏蛋白［60］。

图2-4　小肠类器官的形态结构［17］(https://www.daowen.com)

人肠癌类器官在光学显微镜下应边缘清晰、透亮，由细胞簇组合而成，呈现致密型、松散型、囊泡型或混合型等形态特征。分化型肠腺癌类器官的免疫组化标志蛋白CDX2和CK20应呈阳性且表达分布无极性、排列紊乱［61］。肠腺癌类器官可不同程度地表达CEA、CDX2、CK20、PCNA和Ki67。

单细胞测序结果可进一步明确肠道中各类细胞标志物的表达，如LYZ在潘氏细胞中表达，ASCL2在干细胞中表达，DMBT1在TA细胞中表达，KRT20、ANEP和CEACAM6在肠吸收细胞中表达，以及REG4在肠内分泌细胞中表达。值得注意的是，小鼠小肠的潘氏细胞表达Wnt3和Wnt11［62］，而在人十二指肠的潘氏细胞中并未检测到Wnt家族成员的表达，这提示了人肠干细胞完全依赖于相邻生态位的Wnt信号［47］。此外，结直肠类器官的单细胞测序结果也进一步明确了表达FABP1的肠上皮细胞、MUC2的杯状细胞、RAGAB的潘氏细胞和表达OLFM4的干细胞等。

对于消化道肿瘤类器官，其应具有与原始肿瘤组织一致的形态学表型，其组成细胞应具有肿瘤细胞的异型性特征，如核深染、异常核分裂象、核质比失调等。对其进行基因变异检测时，检测结果应与原肿瘤组织的基因变异结果一致。此外，还需进行STR检测和分型鉴定，结果应与供体STR一致。