2.3.2　胃类器官的鉴定

由PSCs诱导分化成为胃类器官的过程中，首先发生的过程是形成以SOX2和HNF1B共表达为特征的前肠后端类球体。随后，RA信号的刺激将前肠后端类球体诱导至指示胃窦命运的表达SOX2/PDX1分子的上皮细胞中［24］。干细胞向类器官转化的下一个阶段特征是假复层上皮细胞生长成精细的腺上皮细胞。培养3～4周时，类球体急剧膨胀为含有复杂柱状上皮的类器官。在后期阶段，类器官显示出高度结构化的组织，并形成未成熟的小窝和腺体结构域。早期未成熟的假复层上皮共表达转录因子SOX2、PDX1、GATA4和KLF5。然而在后期，随着上皮细胞形成腺体和凹陷，SOX2被下调，而其他因子的表达得以维持。此外，早期球状中胚层在类器官分化过程中扩张，表达包括FOXF1和BAPX121在内的间充质转录因子，并分化成为黏膜下成纤维细胞和少量ACTA2上皮下肌成纤维细胞［24］。胃窦类器官还含有表达Lgr5的干细胞和专门的内分泌细胞。后期在腺体底部包含完整的内分泌细胞谱系，这些内分泌细胞可分泌激素胃泌素、生长素释放肽、生长抑素和血清素。(https://www.daowen.com)

而由ASCs来源的胃类器官一般呈空泡状，通过免疫组化或免疫荧光等方法可以观察到表达PGA5的主细胞和表达MUC6的颈黏液细胞。通过调整培养基中的成分可以诱导更多细胞类型的成熟，其中包括表达MUC5AC的胃表面黏液细胞、表达GAST、GHRL、SST和HDC的内分泌细胞。对人胃的单细胞测序发现贲门区和胃体区的胃细胞聚集在一起，而幽门区的胃窦腺则形成单独的细胞簇，与其他上皮细胞分开。并且，人和小鼠胃的单细胞测序表明，除了胃固有因子在小鼠的主细胞和人的壁细胞是特异表达外，胃上皮细胞，如主细胞与壁细胞之间，还存在更多的表达差异基因［47］。在人胃中还鉴定出一群高表达FABP5、NME1、MYC和增殖基因的干/祖细胞群［59］。