2.3.1　食管类器官的鉴定

如前所述，在PSCs来源的类器官构建中，PSCs经过诱导分化产生前肠，可进一步分化为食管类器官。在该过程中，可以通过胚胎食管标记物，如KRT5和KRT7来鉴定和标记食管祖细胞（esophageal progenitor cells，EPCs）。同时可以通过分选表达上皮特异性标记EPCAM和ITGB4的细胞来纯化EPCs。纯化后的EPCs经诱导分化成为食管基底细胞，BMP和Notch信号通路的激活导致KRT13和Involucrin等分化标志物表达增加，使得EPCs进一步分化成熟为食管类器官［27］。(https://www.daowen.com)

食管类器官形成了从基底细胞到成熟鳞状细胞的上皮分化梯度［56］。复层鳞状上皮的细胞组成决定了其衍生出的类器官整体表现为类似实心圆球的结构。在基质胶中，食管类器官从单个细胞自发组织形成球型结构，并且向中心形成扁平化鳞状上皮的增殖-分化梯度，最外层是基底细胞，向内为不同分化程度的角质细胞。同样地，组织学染色表明，类器官的切面多为圆形，最外层为基底细胞，角质细胞向内移行并逐渐分化成熟，最内层可见无核染色的类角质层结构。通过检测关键蛋白的分布和表达水平，发现P63、KRT5和SOX2等在最外层的基底细胞中高表达，内层的角质细胞主要表达KRT4和KRT13等［39，57，58］。单细胞测序结果也证明了食管是从基底干细胞到终末分化角质细胞的线性进展［47］，但KRT5在食管上皮中为泛表达，并在早期角质细胞中表达水平最高。此外，还鉴定出一群高表达COL17A1、KRT15和Notch通路相关基因DLL1和JAG2的静止的食管干/祖细胞［47］。