14.2.6　药物敏感性测试

某些生长因子或其他培养基成分可能会通过与药物相互作用等方式影响肿瘤类器官对被测药物的反应或与药物相互作用，应在药敏筛选前进行相应调整。当类器官状态良好时可以开始药敏测试。肿瘤类器官药物敏感性的常用判断方法主要包括基于Cell Titer-Glo®3D发光法（CTG法）和面积变化法，其对应的类器官处理方式也存在差异。此外，根据类器官培养方式及药物种类不同，药物敏感性测试的方法均有差异，需要根据不同培养模型和实验目的选择合适药敏方式。

在类器官铺板的当天，可将中性蛋白酶添加到类器官中以去除基质胶。随后对类器官进行清洗和过滤以去除较大的类器官，计数类器官后按照合适的密度将其重悬于基质胶中，并在基质胶凝固后加入类器官培养基。用药物或X射线处理类器官，然后利用Cell Titer-Glo®3D细胞活力检测试剂充分裂解类器官团内部的细胞后进行化学发光检测，测得的发光值与ATP量成正比。由于ATP是活细胞新陈代谢的指标，故可根据发光值判断类器官的活力大小。该方法适合大规模高通量的抗肿瘤药物筛选以及肿瘤放射敏感性测定等［35］。(https://www.daowen.com)

MOSs的药物敏感性也可采用CTG法进行判断。研究人员在384孔板中以1 m M的浓度预先加入各待测药物，然后按照每孔100个MOSs进行种板，72小时后通过CTG法评估细胞活力，从而实现快速的体外高通量药物筛选［27］。

章真和华国强团队［18］通过类器官面积变化法检测了直肠癌类器官对5-FU、伊立替康和X射线治疗的敏感性。该方法为在肿瘤类器官铺板后状态良好时，加入含合适浓度化疗药的培养基或进行X射线照射，然后继续转移至培养箱中培养；该方法的主要判断标准是在药筛第24天类器官面积与药筛开始（第0天）类器官面积之比。此方法简便快捷，其检测结果已被证明与CTG法结果相似，且能够与患者的疗效匹配，准确率在80%以上。