实验室污染应急预案
1.精液或胚胎污染:
(1)污染提示:
①过夜精子培养液中见较多密集的颗粒状物。
②受精液或Day3卵裂期培养液中出现异常(如培养液混浊或有颗粒状物质)。
③常规受精完全失败。
(2)污染的观察:倒置显微镜下(400×)下观察确认。
(3)污染处理:
①污染明显:受精液中布满大量的颗粒状物,精子大多数不活动,颗粒细胞贴壁生长差,可以当日进行精液及胚胎培养液的细菌培养鉴定及药敏实验,并通知患者取消移植。
②不能确定是否污染:如上述情况不是很明显,到Day3移植日再继续观察。
(4)Day3胚胎的处理:
①胚胎培养液中未见异常,胚胎发育良好,移植。
②胚胎培养液中发现明显污染迹象(如培养液混浊或有大量颗粒),通知患者,取消移植,将精液沉淀及受精液或胚胎培养液进行细菌培养鉴定及药敏实验。
③胚胎培养液中难以确定是否污染(如有少量颗粒等),胚胎发育良好,冷冻胚胎,并将精液沉淀及受精液或胚胎培养液进行细菌培养鉴定及药敏实验,待细菌培养结果明确后视情况决定是否进行胚胎的解冻及移植。如果细菌培养结果表明有污染发生,建议患者放弃冷冻胚胎,重新取卵。如果细菌培养结果表明无污染发生发,则进行解冻移植。
④对于Day3无法确定是否污染的患者,如果胚胎发育良好,也可以将胚胎进一步培养到Day5或Day6,视对培养液观察的具体情况及胚胎发育情况决定是否移植或冷冻胚胎。
(5)污染来源的判定:根据对培养液的观察及微生物学检查的结果初步判定污染的来源。简言之:如果过夜精子或精液沉淀有污染则污染与精液有关,洗卵液发生污染则污染与卵有关。具体情况如表7.2所示
表7.2 污染来源的判定
2.培养箱污染:
根据污染源不同主要可以分为生物性污染、化学性污染、物理性污染和气溶胶污染。
(1)生物性污染:这是最常见也是危害最大的污染,如细菌、真菌(霉菌和酵母菌)、病毒、支原体污染等。这些污染源有可能是人为带入,或是胚胎在放入培养箱前已经受污染,再或者是箱体本身没有消毒干净。体外培养的胚胎自身没有抵抗污染的能力,而培养基中所加抗生素的抗微生物污染的能力也是有限的,因而微生物污染一旦发生往往是无法挽救的。
①支原体污染:支原体污染后,因为它们不会使胚胎死亡,可以与胚胎长期共存,培养基一般不发生浑浊,胚胎无明显变化,外观上给人正常感觉,实则胚胎已经受到多方面潜在影响,如引起胚胎变形,影响DNA合成,抑制胚胎生长等,往往被大多数实验者忽视。
②细菌污染:细菌污染后,培养基1～2天就会变色,培养液一般会浑浊变黄,对胚胎生长影响明显,应迅速将污染胚胎与其他胚胎系隔离,灭菌后丢弃,还要用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台。
③病毒污染:由于病毒寄生生存,污染爆发后尽快和正常胚胎隔离,丢弃处理。相对来说容易处理,但对操作者威胁较大。尽管病毒污染的胚胎不影响原代培养,但生产疫苗是不安全的。因此,潜在病毒是胚胎大量生产和疫苗、干扰素等生物制品制作中的难题。
④真菌(霉菌和酵母菌)污染:真菌生长的比较慢,不像细菌那么容易被发现,但是一旦发现有它的存在胚胎就被污染了。目前传统的灭菌方式很难将其杀灭,包括现在常用的两性霉素。一旦污染,容易反复爆发,尤其孢子很难杀灭。
(2)化学性污染:培养箱中许多化学物质都可以引起胚胎污染。如胚胎培养容器清洗过程中残留的洗涤剂、加湿器中未纯化的水、人为带入的液体或气体,都可能成为化学性污染的来源。不同化学物质对胚胎污染是不一样的,有的可能促进或抑制胚胎生长,有的甚至可杀死胚胎。
(3)物理性污染:培养环境中的物理因素,如温度、放射线、振动、辐射(紫外线或荧光)会对胚胎产生影响。物理性污染常常被人们忽视或被笼统地归为化学性污染。物理污染主要是在代谢水平或分子水平上影响胚胎正常的生理过程。(https://www.daowen.com)
(4)气溶胶污染:气溶胶是液体或固体微粒均匀地悬浮在气体介质中的分散体系。当微粒是微生物时,就是微生物气溶胶;如果这种微生物是病原性的,就是病原微生物气溶胶。细菌、病毒等病原体通过气溶胶可在人与人、人与环境之间传播。微生物气溶胶可分为两大类:一类是飞沫核气溶胶,另一类是粉尘气溶胶。医学实验室内许多操作都可以产生气溶胶,并且大多可能是病原微生物形成的感染性气溶胶。由于气溶胶分子小,飘浮在空气中,黏附于人身上,易在空气中扩散而污染实验室的空气。
(5)二氧化碳培养箱的消毒和灭菌:
①如果培养箱发生生物性污染,应立即对培养箱进行消毒,并分析污染原因,培养箱外部箱体及内部非金属部分使用专业灭菌液擦拭,金属部件送供应室统一灭菌。
②仅在水盘中发生霉菌污染,则可在水盘中加入适量新吉尔灭进行消毒。
③如果发生大范围霉菌污染,则需对培养室进行彻底的湿式清扫,并完善消毒隔离制度;用含有效氯1000mg/L的消毒液擦拭培养室内物体表面,用2%碘酒与75%乙醇溶液消毒培养箱内表面,用紫外线照射及2%戊二醛熏蒸消毒空气。随后再检测,细菌总数均未超标,霉菌均未检出,则消毒有效。
④灭菌过后要对培养箱设定值及实际值进行调试和检测,数据无误后空转48h,之后再进行一次检测。数值正常且稳定后进行精子存活实验,精子在48h后活力≥70%、存活指数≥80%,确认精子存活实验通过,方可开始胚胎培养。
⑤消毒过后要填写《培养箱消毒记录》,并将消毒佐证材料归档,佐证材料包括但不限于灭菌卡、精子存活实验记录等。
3.标本溢洒、泄漏及意外损伤:
(1)实验室如果发生一般标本溢洒事故,按生物安全的有关要求选择敏感的消毒液进行消毒处理。
①如果标本泼溅在实验室工作人员皮肤上,立即用75%的酒精或碘伏进行消毒,然后用清水冲洗。
②如果标本泼溅在实验室工作人员眼内,立即用生理盐水或洗眼液冲洗,然后用清水冲洗。
③如果标本泼溅在实验室工作人员的衣服、鞋帽上或实验室桌面、地面上,立即选用75%的酒精、碘伏、0.2%～0.5%的过氧乙酸、500～1000mg/L有效氯消毒液等进行消毒。
④如果潜在感染性物质溢出,立即用布或纸巾覆盖,由外围向中心倾倒消毒剂,一定时间(约30min)后,清除污染物品,再用消毒剂擦拭。
⑤所有操作戴手套。
(2)实验室发生含有高致病性病原微生物的样本(艾滋病、乙肝、梅毒等)泄漏、污染时,实验室工作人员应及时向实验室污染预防及应急处置专业小组报告,在2h内向感染控制科报告,并立即采取以下控制措施,防止高致病性病原微生物扩散。
①封闭被污染的实验室或者可能造成病原微生物扩散的场所。
②开展流行病学调查。
③对相关人员进行医学检查。
④对密切接触者进行医院观察。
⑤进行现场消毒。
⑥其他需要采取的预防、控制措施。
(3)如果工作人员意外吸入、意外损伤或接触暴露,应立即紧急处理,并及时报告实验室污染预防及应急处置专业小组。
①如工作人员操作过程中被污染的注射器针刺伤、金属锐器损伤时,应立即实行急救。
②首先用肥皂和清水冲洗伤口,然后挤伤口的血液,再用消毒液(如75%酒精、2000mg/L次氯酸钠、0.2%～0.5%过氧乙酸、0.5%的碘伏)浸泡或涂抹消毒,并包扎伤口(厌氧微生物感染不包扎伤口)。
③必要时服用预防药物,如果发生HIV职业暴露时,应在1～2h内服用HIV抗病毒药。
