实训44　血清学反应——琼脂扩散沉淀反应

一、实训目的

通过本次实训，学习和掌握琼脂扩散方法。

二、实训原理

由可溶性抗原（如血清、细菌浸出液等）和相应的抗体在半固体琼脂内扩散产生的沉淀反应，即琼脂扩散沉淀反应。琼脂扩散是沉淀反应中较灵敏的方法，特异性强，应用很广。

三、实训器材

1．材料和试剂

破伤风类毒素，破伤风抗毒素。

1．5%生理盐水琼脂：1．5%琼脂100mL，叠氮化钠0．1g，pH　7．2，NaCl　0．85%。

2．器具

载玻片，φ10cm培养皿，直径3mm打孔器，吸管，滴管，橡皮头，9号针头，滤纸片。

四、实训步骤

1．稀释

将破伤风抗毒素（抗体）稀释成1∶10、1∶20、1∶40、1∶80、1∶160和原液6种浓度。

2．打孔(https://www.daowen.com)

在洗净的载玻片上，用吸管加上3mL熔化的1．5%生理盐水琼脂，使其平铺于载玻片上约3mm厚，待凝固后，用直径3mm打孔器打成梅花形的7个小孔，如图3－41所示。孔间的距离为5mm，打孔以后用9号针头把琼脂块挑出来。

图3－41　载玻片上凝固琼脂打孔示意图

3．加抗原抗体

在中间的1号孔中加入抗菌素原液，周围小孔分别加入各种稀释度的抗体，添加量均为50mL。

4．湿室保温，观察反应

在培养皿底放一吸足水分的滤纸，做成湿室，把加了抗原抗体的载玻片放在湿室中，于28℃或30℃环境中过夜，让抗原抗体自然扩散，24h后观察抗原抗体反应后所呈现的沉淀带。

五、结果记录

绘图说明实验结果。

六、思考题

（1）琼脂扩散法能否用于凝集反应？

（2）本次实验有什么收获或体会？