【基本概念】

无菌、无菌操作

【重点内容】

微生物实验室检验员基本职业素养的培养。

【教学目标】

1．知识目标

熟悉实验室规则及微生物实验室基本要求。

2．技能目标

通过参观实验室及学习规则，培养微生物实验室检验员基本职业素养。

资 料 单

一、实验室规则

（一）防止病原微生物的携带和扩散

（1）进入实验室应穿实验服，如在试验过程中沾上带有微生物的液体和其他试剂或进行了烈性细菌试验，应将实验服脱下于高压蒸汽灭菌器内灭菌或浸于消毒药水中过夜后再进行洗涤。

（2）含有液体培养物的试管应竖列在试管架上，不可平放在桌子上，以防管中液体流出而造成污染，一旦细菌培养物或病料污染桌面或地面时，应敷以浓消毒药覆盖过夜。

（3）实验室中禁止饮食，不得用嘴湿润标签等物，也勿用手或他物与面部接触。

（4）操作危险材料时勿谈话或思考其他问题，以免分散注意力而发生意外。

（5）试验过程中若发生试验人员吸入细菌、划破皮肤等意外事故时，应立即自行处理，必要时到医院就医。

（6）微生物实验室内的菌种或毒种不得带出实验室，若必须带出，则应严格按规章制度经专门管理人员办理。

（7）试验完毕后最好先用消毒药水或肥皂洗手，后用清水冲洗。

（二）实验室部分仪器使用注意事项

（1）节约使用试验所用药品、试剂、染色剂、镜油、擦镜纸等，避免不必要的浪费。

（2）仪器使用时要按操作规程进行，用后擦拭干净放到指定位置，以避免不必要的损耗和意外。

（3）吸管、试管置于试管架上时，要轻放到试管架底部再松手，以免试管底部破损。

（4）平皿放置时，一般皿底在上皿盖在下，以免拿时皿底掉下摔破。

（5）金属器皿煮沸消毒或高压消毒后，应立即擦干，防止生锈。

（三）标记要明确、结果记录要及时

试验所用的各种试剂、染料、培养物、动物等，需标记明确。如果使用物品需经高压消毒，其标签应用深色铅笔或记号笔书写，防止消毒后字迹变得模糊不清。

每项试验的操作结果、观察的现象及试验数据都应有及时、详细、清楚的记录。

（四）实验室安全隐患

（1）实验室内一切易燃物品应远离火源。在使用酒精灯时，不可将酒精灯倾斜向另一酒精灯引火，以免发生爆炸。

（2）进入实验室应先了解水、电、气闸所在之处。离开实验室时，一定要检查一遍，将水、电、气关好，门窗锁好。

（3）使用电气仪器时，绝不可用湿手触及电闸和电气开关，严防触电。实验室应备有测电笔等常用检测工具，要定期检查，凡是漏电的设备，一律不能使用。

（五）清洁与秩序

每日开始工作前，地面清扫洒水，清洁桌面。工作时各种试验操作应严格按操作规程和要求进行。工作完毕后应将实验室中各物放回原处或指定地点，对实验室整理、清洁，检查无误后离开。

二、微生物实验室的一些基本要求

（一）无菌操作要求

无菌是不含有活的微生物的意思。用物理或化学方法，防止微生物进入机体或物体的操作，叫作无菌技术或无菌操作。为了防止试验操作过程中人为污染样品或由于操作不当而引起致病菌的散布，以保证工作人员的安全，食品微生物实验室工作人员必须有严格的无菌操作观念。

（1）进行试验时，必须穿经紫外线消毒后的专用工作服和鞋帽，并将手用75%酒精棉球擦干净。

（2）接种所用的吸管、培养基必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，放置后不能再次使用。包装中的吸管尖部不能外露，使用时不得触及试管壁或平皿边缘。

（3）必须在酒精灯前进行接种细菌操作，接种细菌用的试管管口、瓶口在打开后及关闭前，应于火焰上通过1～2次，以杀死可能从空中落入的杂菌或其他污染物。

（4）打开瓶塞或试管塞时，应将棉塞夹于手指间适当的位置，不得任意放置别处。

（5）金属用具应高压灭菌或用95%酒精烧灼后使用，接种环和接种针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环与杆的连接处。接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5 min，再经火焰烧灼。无菌操作取菌种如图3-1所示。

（6）用吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。

（二）无菌操作间使用要求

（1）无菌操作间内应设有相应的缓冲间及推拉门，并要有与外间相通的窗户，一般都是用密封的双层玻璃制成，窗户上必须留有小窗，用于传递物品。窗户和小窗平时都不得随意打开。

图3-1　无菌操作取菌种

（2）无菌操作间内应保持清洁，不得存放与试验无关的物品。

（3）工作后应清洁打扫，然后用消毒液或紫外灯消毒，照射时间不少于30 min。操作人员不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤。紫外灯管每隔一段时间需用酒精棉球轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响。

（4）一旦进入无菌间进行操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗进行。

（5）无菌操作间内若要装置空调，则应装有相对应的过滤装置。

（三）病原微生物污物处理要求

微生物实验室所用的试验器材、培养物、菌种及使用过的器皿等未经消毒处理，一律不得带出实验室。

（1）被微生物污染的材料及废弃物应放在严密的容器或铁丝筐内，并集中存放在指定的地点，待统一进行高压灭菌后再进行洗涤；试验用过的动物脏器、血液、尸体等应消毒后焚烧或掩埋。

（2）培养过微生物的培养皿或者试管，必须经121 ℃30 min高压灭菌后方可清洗。

（3）吸过含有微生物培养液的吸管、染色的玻片，应放入5%煤酚皂溶液或石炭酸溶液中浸泡24 h，消毒液要高于浸泡的吸管或玻片的高度，或者经121 ℃30 min高压灭菌后再清洗。

（4）在涂片染色过程中冲洗过玻片的液体，应放置数天后再直接冲入下水道，烈性菌的冲洗液应经高压灭菌后方可倒入下水道。

（5）打碎的培养物，立即用5%煤酚皂溶液或石炭酸溶液喷洒和浸泡被污染部位，24 h后再擦拭干净。

（四）灭菌处理要求

（1）灭菌物品取出后应检查包装的完整性，如发现包扎纸破裂、包装有水分浸入、棉塞脱掉等现象，此物品不可作为无菌物品使用。若培养基或其他试剂灭菌后色泽异常，则不应使用。

（2）取出的物品掉落在地面、误放不洁之处或沾有水液，均视为受到污染，不可作为无菌物品使用。

（3）取出的合格灭菌物品，不得与未灭菌物品混放，应存放于贮藏室或防尘柜内。(www.daowen.com)

（4）凡属合格物品，应标有灭菌日期及有效期限。每批物品灭菌处理完成后，还应记录好灭菌品名、数量、温度、时间、操作者等。

（五）样品采集及处理要求

（1）所采集的检验样品一定要具有代表性，应在采样时详细调查该批食品的原料、加工、运输、贮藏条件、周围环境卫生状况等。

（2）采样时应在无菌条件下操作，即容器及所用剪、刀、匙用具必须灭菌，但应注意不得用煤酚皂、新洁尔灭、酒精等消毒液灭菌，以免杀死样品中的微生物。此外，还要防止环境中的微生物可能造成的污染。

（3）采样的数量及方法应按标准检验的要求和方法进行，并要保证采样的随机性。

（4）采集的样品要尽快送到食品微生物检验室，一般应不超过3 h。环境温度较高或路途较远的情况下应进行冷藏。不需冷冻的样品应放在1 ℃～5 ℃环境中送检，可以用冰盒送检。需要冷冻的样品，则需放在0 ℃以下的环境中送检，可以用泡沫塑料隔热箱。但应注意，样品的送检及存放都不得使用任何防腐剂。

（5）检验室收到样品后，应登记样品名称、送检单位、数量、日期、编号等，之后应立即进行检验。如果检验的条件不具备，则应置于4 ℃冰箱存放。如果发现有下列情况之一的，应拒绝检验。

①样品失去代表性的，如经过特殊高压、煮沸或其他方法杀菌者。

②样品失去原有食品形状者，如瓶、袋装食品已开启者，熟肉及其制品等已折碎不完整者，但食物中毒样品除外。

③不按规定进行采样者，如采样数量不足者。

（6）样品检验时，根据其不同性状，可适当进行处理。

①对于液体样品，接种时应充分混合均匀，按量吸取后再进行操作。

②对于固体样品，可以用灭菌刀、剪分别从不同部位取样共25 g，剪碎或研磨后置于225 mL灭菌生理盐水或其他溶液中，混匀并按量吸取接种。

③对于瓶、袋装食品应在无菌条件下开启，并根据性状选择适当方法处理后再接种。

技 能 单

一、材料与设备

灭菌器、生化培养箱、干燥箱、显微镜、金黄色葡萄球菌及枯草芽孢杆菌染色玻片标本、链霉菌及青霉菌的水封片、香柏油、二甲苯、擦镜纸等。

二、流程

做好准备工作→参观→进行微生物实验室常见的各种操作。

三、方法与步骤

微生物实验室的参观与无菌操作的观摩学习。

（1）各小组做好进入微生物实验室之前的准备。

（2）以小组为单位参观微生物实验室。

（3）以小组为单位进行细菌培养液的吸取、含有细菌培养液试管的处理等操作。

四、实训报告

写出你所参观的微生物实验室在防止细菌散布或在处理有毒有害物品等方面还需要做哪些改进。

作 业 单

一、判断

1．微生物实验室中使用酒精灯时不可将酒精灯倾斜向另一酒精灯引火。　　　（　　）

2．接种所用的吸管、培养基，若打开包装后未使用完，则可放置再次使用。　　（　　）

3．试验过程中为了应急可用嘴湿润标签等物。　　　（　　）

4．平皿放置一般皿底在下皿盖在上。　　　（　　）

二、简答

1．微生物实验室中为什么禁止零食？

2．若在试验过程中不小心将培养液溅到实验服上，应如何处理？

3．若在试验过程中不慎将还有培养液的试管摔碎在地上，应如何处理？

4．若要接种细菌，如何能达到无菌操作？

评 估 单

【评估内容】

一、名词解释

无菌操作

二、填空

1．手臂灭菌可用（　　）%酒精棉球擦干净。

2．采集的样品要尽快送到食品微生物实验室进行检验，一般应不超过（　　）h。

3．如果检验的条件不具备，则样品应置于（　　）℃冰箱存放。

4．紫外灯消毒，照射时间不少于（　　）min。

三、简答

1．食品微生物实验室有哪些规则？

2．吸过微生物的吸管、染色的玻片应如何处理？

3．微生物实验室中防止微生物散布的方法有哪些？

四、操作

进入微生物实验室前的准备及进行微生物试验常用的基本操作。

【评估方法】

以小组为单位进行评估。主要是在试验过程中进行，检查各小组是否掌握防止微生物散布的方法，同时对各小组人员随机抽取2人进行提问，提问分数以2人平均分数计。

优：小组能独立并正确完成各项工作，正确回答问题。

良：小组能独立并正确完成大部分工作，个别环节需提示才能完成。

及格：小组能基本完成大部分工作，其他环节有错误。

不及格：小组不能独立完成各项工作。

备注：项目十六任务一学习情境占模块三总分的3%。