3．1 精液常规分析指标
精液是由精子和精浆两部分组成。精液常规分析主要包括：精液量、精液的颜色、黏稠度、凝集、液化时间、pH值、精子密度、精子活动力、精子存活率、精子形态、圆细胞数量以及一些免疫学检测指标等。
3．1．1 精液的采集和运送
标本的采集规范化是做好精液分析的前提条件。因此，实验室技术人员应严格按照规范操作，并告知受检者有关精液采集和运送的方法及注意事项。
要求受检者采精前禁欲2～7天，用手淫法采精，精液应收集于干净、广口的玻璃或塑料容器中，并立刻交给实验室技术人员，放置37℃恒温环境中液化。技术人员应记录受检者姓名、禁欲时间、收集时间、样本是否完全、采样至分析的时间间隔。
精液标本可能含有致病菌和病毒（如HIV病毒、肝炎病毒、单纯疱疹病毒等），因此应视为生物危险品。实验室技术人员应注意防护，要使用一次性手套和器皿。用过的器皿要消毒处理。精液培养用于生物测定、宫腔内受精或体外受精，在处理过程中必须严格使用无菌材料和无菌操作。
精液采集注意事项如下：
（1）若需对同一对象进行多次精液分析，为减少精液分析结果的波动，禁欲的天数应尽可能恒定。
（2）提供实验室附近的密室供采集精液。
（3）采精前应排净尿液，洗净双手和阴茎。
（4）收集精液的容器应对精子无毒性作用，有杀精作用的避孕套等不适合应用。
（5）精液样本须采集完整，若采集不全，应记录情况。
（6）若采精地点离实验室尚有一定距离，则需置于贴身衣袋或保持在20～37℃，1小时内送检，尽量减少外界温度变化对精液的影响，并记录采精地点、时间等情况。
（7）精液采集过程中的任何不同于规范的操作，实验室技术人员都应记录清楚。
（8）如手淫取精有困难，可用特制的避孕套进行精液采集。日常用的乳胶避孕套会影响精子的存活，故不能用于采集精液。性交中断法也不宜用于采集精液，因为射精最初精液部分可能丢失，这部分精液中的精子浓度通常是最高的，且标本可能会受到女性生殖道内微生物的污染，同时酸性的阴道分泌物对精子活力也会产生不利的影响。
3．1．2 精液检查
3．1．2．1 精液的一般检查
（1）外观：正常刚射出的精液呈胶冻状，灰白色或灰黄色，液化后则变成半透明的乳白色或乳黄色。
（2）液化时间：从精液射出到精液完全液化所需要的时间谓精液液化时间。正常情况下，精液射出后立即放入37℃恒温水浴箱内30分钟，精液即液化成完全流体状。如果＞30分钟，精液仍然与射出时一样呈凝胶状，则认为精液不液化。如果30分钟后精液出现部分液化，但黏稠度很高或通过反复抽吸后能基本液化，则称之为精液液化不良。
精液液化主要是由前列腺分泌的液化因子完成。因此，前列腺感染或炎症时往往出现精液液化不良或不液化现象。
（3）黏稠度：是指已液化精液的黏度。评估方法是用塑料滴管（直径约1．5mm）将已经液化的精液吸入管内，让精液依靠重力自然滴落，观察其成丝的长度。正常已经液化的精液在管口形成不连续的小滴，而黏稠度异常的精液滴下时会形成＞2cm的长丝。精液黏稠度异常往往会影响精液其他指标的测定，比如精子活动力、精子浓度、精子表面抗体和生化指标的测定。降低黏稠度的方法与处理液化延迟相同。
（4）精液量：精液量的测量必须是整份精液，最好在精液完全液化后，用锥形底的刻度量筒或一次性的10ml左右的刻度离心管，或者对精液放入的容器前后称重获得。正常成年男子一次射精量在2～6ml不等，临床上将一次排精量＜1．5ml（《WHO精液检测手册》第四版及之前的版本为＜2ml），视为精液量偏少；如果一次排精量＞6ml，则认为是精液量过多。
精液量过少可造成精子浓度过高，影响精子的营养分配和运动；精液量过多可造成精子浓度下降，且容易从阴道中溢出，反而使进入宫腔的精子数量减少，影响受精。
（5）酸碱度：酸碱度用pH值表示。pH值的测定应在液化后立即进行，精液放置时间过长也会影响pH的结果。正常精液的pH在7．2～8．0，＜7．2或者＞8．0均视为异常。
影响pH的最常见因素是附性腺的炎症或缺如，患前列腺炎时由于前列腺功能减退或分泌不足，导致前列腺液的pH值升高，精液偏碱性；而当患精囊腺炎症时，由于精囊腺的分泌不足，导致精液量减少，精液pH下降，变成酸性。
3．1．2．2 精液的显微镜检查
（1）精子计数：精子计数是精液分析中最为重要的部分，WHO手册介绍了不同类型的精子计数板和格栅的使用方法。WHO推荐用100μm深的改良的Neubauer血细胞计数板，它的两侧有两个独立的计数池，为3mm×3mm的格子。将精液按合适的比例（1∶5，1∶10，1∶20，1∶50）稀释并混匀后，向血细胞计数板两侧的计数池转移约10μl的精液，并在15分钟之内检测样本，以防止挥发。每侧至少应数200个精子（太少容易导致结果不稳定），且只有完整的精子才能计数。如果两侧结果接近，则可根据稀释比例和计数的格子数计算每毫升的精子浓度；根据射精体积计算精子总数；若差异太大，则需重新制备标本。
正常生育力男性的精子浓度的下限参照值为15×106／ml（95%可信限（confidence limit，CI）为12×106～16×106／ml）；精子总数（每次射精）的下限参照值为39×106（95%CI 33× 106～46×106）。以上参照值标准来自WHO手册第五版，第四版及以前版本中精子浓度的下限参照值为20×106／ml，精子总数（每次射精）的下限参照值为40×106。
（2）精子活动力：应在精液液化后立即检测，最好在30分钟内，至少在射精后1小时内，以防止脱水，以及pH和温度变化对活动力产生负面影响。建议最好使用保温镜台，台面温度恒定在37℃。
先扫描全片，随机选择特定大小的视野（有微标尺则很容易控制），避免特意选择活精子区域或重复观测同一区域。注意：只评估完整的精子。
第五版《精液检测手册》对精子活动力的分级标准如下：
1）前向运动（progressive motility，PR）：精子自主运动，或线性或大环状，不考虑速度。
2）非前向运动（non－progressive motility，NP）：所有其他运动方式的精子，没有前进。例如：小环状游动、鞭毛带动头部运动，或仅见鞭毛鞭打。
3）不运动（immotility，IM）：没有运动。
以前版本的《精液检测手册》是将前向运动精子分为快速（a级，即37℃时≥25μm／s）和慢速（b级）精子，但技术人员很难无偏地准确定义前向速度。
当讨论精子活力时，应说明是总活动力（PR＋NP）或是前向活动力（PR）。精子前向运动率与妊娠有关。
快速计数，避免高估活动精子（防止不仅计数开始在此区域的精子，又加上了计数过程中游入该区域的精子）。先计数PR精子，然后是NP精子，最后是IM精子。有经验的技术人员可以同时计数这3种精子。
应观察至少5个视野，200个精子。需制备两份湿片，分别计数各级精子所占百分数，若两次百分率的差异未超出表3．1内的规定数，则说明差异可接受，取各级的两次均值即可。如果差异太大，则需再制备两张新片，重新评估。
下限参照值：
总运动率（PR＋NP）：40%（95%CI 38%～42%）。
表3．1 特定百分率均值时，重复计数200个精子可接受的两次差异
前向运动率（PR）：32%（95%CI 31%～34%）。
（3）非精子细胞成分：精液中常含有一定的非精子细胞的成分，主要包括上皮细胞、前列腺细胞、生精细胞和白细胞，统称为“圆细胞”。一般情况下，一份正常的精液所含圆细胞不应超过1×106／ml。如果细胞体积很大，则可能是脱落的上皮细胞；如果细胞体积大且形态规则，呈椭圆形，核染色质明显，颗粒大且松散，则可能是精母细胞；如果细胞体积中等，有成堆或成团现象，精液颜色偏黄，则可能是白细胞；如果细胞体积小而圆，精子数量又少，则可能是精子细胞；如果是折光率很强的大小不等的圆形小体，则可能是前列腺小体。当然，这只能是初步的判断，详细观察还必须通过特殊的染色。
精液白细胞检查可通过以下方法：
1）正甲苯胺蓝／邻甲苯胺蓝过氧化物酶染色法
原理：过氧化氢进入白细胞中，与胞内的过氧化物酶反应，释放水和游离氧，这些游离氧与甲苯胺蓝反应，会变成棕色。
优点：最大优点是操作简单，但它不能检测已经活化并已释放其颗粒的多形核白细胞，也不能检测不含过氧化物酶的其他种类的白细胞。
2）免疫细胞化学法
原理：CD45为人类精液白细胞共同抗原，CD45单克隆抗体与精液白细胞上的CD45结合后，再经一系列的酶联免疫放大反应，可定量分析精液中白细胞的数量。
优点：灵敏，特异性强，结果准确可靠。
（4）精子凝集：无论是运动或不运动的精子结合到黏丝、非精子细胞或碎片上均属于聚集，应该记录。
精子凝集是特指活动精子相互黏合，黏合类型有头对头、尾对尾或混合型，如头对尾，彼此粘在一起（图3．1），精子凝集的类型应当记录。不活动精子之间、活动精子与黏液丝之间、非精子细胞成分或细胞碎片等粘在一起，为非特异性聚集而非凝集，这种情况也应如实记录。
精子的凝集可采用一种半定量的分级方法如下：
第1级，每个凝集单元中包含＜10个精子，还有许多自由的精子；
第2级，每个凝集单元中包含10～50个精子，有一些自由的精子；
第3级，每个凝集单元中包含＞50个精子，仍有自由的精子；
第4级，所有精子都相互凝集在一起。
图3．1 精子凝集（Rose等，1976年，Wiley Blackwell授权）
（5）精子形态
1）制备涂片：应注意涂片不宜太厚；另外，如果精液涂片的精子太密，应取更少体积的精液或进一步稀释标本后，重新制备涂片。至少作双份新鲜精液涂片，一份可作为染色出问题后的备用涂片，这些涂片可进行空气干燥并固定，染色后供评估。
2）染色方法：WHO推荐使用巴氏染色法或改良巴氏染色法，它可以使精子和其他细胞很好地染色。另外，Shorr染色和Diff－Quik等快速染色法虽然效果不如巴氏染色法，但由于方法简便、快速，国内大多数男科实验室也常规地使用。
3）精子形态分类：WHO第五版《精液检测手册》强调在评估精子正常形态时应采用严格标准，只有头、颈、中段和尾形态都正常的精子才算正常。
4）精子头部正常：形状必须是椭圆形，考虑到固定和染色所致的轻度收缩，精子头部长度为4．0～5．0μm，宽为2．5～3．5μm，长宽之比应在1．50～1．75。顶体界限应清晰，占头部40%～70%。
5）精子头部有缺陷：大头、小头、锥形头、梨形头、圆头、无定形头、有空泡的头（未染色的空泡超过2个或占头部区域20%以上）、顶体后区域有空泡、顶体过小的头（＜头部40%）或过大的头（＞头部70%）、双头，以及上述缺陷的任何组合（图3．2A）。
6）精子中段正常：应细，宽度＜1μm，约为头部长度的1．5倍，并且在轴线上紧贴头部。胞质小滴（精子胞质残留）应小于正常头部50%。
7）颈部和中段有缺陷：其中段非对称地接在头部、粗的或不规则的中段、异常细的中段（即无线粒体鞘）和上述缺陷的任何组合（图3．2B，D）。
图3．2 一些不正常形态人类精子图解
A．头部缺陷 （a）锥形头 （b）梨形头 （c）圆形头，头小且顶体存在或缺如 （d）无定形 （e）头部有空泡 （f）顶体小
B．颈部和中段缺陷 （g）颈部弯曲 （h）中段非对称插入 （i）中段粗 （j）中段细
C．尾部缺陷 （k）尾部短 （l）尾部弯曲 （m） 尾部卷曲
D．胞质小滴缺陷 （n）小滴大于正常精子头的1／3
8）精子尾部正常：精子尾部应是直的、均一的，比中段细，非卷曲的，其长约为45μm。
9）尾部有缺陷：短尾、多尾、尾部断裂、发卡形尾、尾部极端弯曲、尾部宽度不规则、尾部卷曲或上述缺陷的任何组合（图3．2C）。
由于有生育能力男性的精液中，可以有25%～80%的精子与理想中的“标准”精子形态存在一定的差异，致使精子形态学评估非常困难。大多数专家支持采用严格的标准，因此按照WHO第五版的分类标准，只要有4%的正常形态精子，就可认为其精子的形态指标属正常（WHO手册第四版及之前的版本则要求有15%或更高比例的正常形态精子）。
精子形态异常的，一般授精潜力低，尤其是头部异常影响可能更大。形态缺陷也与DNA片段增多、染色体异常或非整倍体增多有关。
（6）精子免疫学检查［3］(https://www.daowen.com)
1）免疫珠试验（immunobilles test，IBT）：试验前，通过反复离心和用缓冲液悬浮洗涤精子，以去除精液标本中的精浆，再将精子悬液与免疫珠悬液混合。活动精子膜表面包被抗体（IgG，IgA或IgM），可与相应二抗（抗IgG，抗IgA或抗IgM）致敏的免疫珠发生特异性结合，因此免疫珠黏附于表面带有抗体的活动精子上，可测知表面带有抗体的活动精子的百分比。
精液中的精子抗体绝大多数属于IgA和IgG两类免疫球蛋白。IgA的临床意义可能比IgG更重要。IgM抗体因为其相对分子量大，在精液中较为少见。
正常参照值：IBT阳性精子百分数＜50%
2）混合抗球蛋白反应试验（mixed agglutination reaction，MAR）：用混匀的未加处理的新鲜精液与包被了人IgG或IgA的乳胶颗粒或红细胞混合，并向混合液中加入特异性的抗人IgG的抗血清。颗粒与活动精子之间形成混合凝集，于是精子表面存在IgG或IgA抗体。
正常参照值：MAR阳性精子百分数＜10%。
临床意义：射精前精子抗体与精子表面相结合，是精子抗体干扰男性生殖的唯一途径。男性免疫不育诊断的主要依据是证实射精精子表面抗体的附着，因此活体精子膜表面抗体检测是免疫不育最具诊断价值的指标。
MAR与IBT试验结果并非经常一致，男性免疫性不育的确证需要在MAR或IBT阳性基础上附加其他的试验，附加试验可以是前者的重复试验、精子－宫颈黏液接触试验。
（7）精子存活率试验
1）精子尾部低渗膨胀试验（HOST）：精子处于低渗溶液（包括水溶液）时，必须重新建立精子膜内外液体的平衡，水分子通过精子膜进入精子，使精子体积增大而膨胀。膜完整的正常精子尾部膨胀明显，而膜不完整或死精子则表现为不膨胀。当精子尾部低渗膨胀百分率＞60%时，为正常；当精子尾部低渗膨胀百分率＜49%时，为异常（图3．3）。
图3．3 人类精子低渗膨胀试验后的典型形态学改变（Jeyendran RS，1984）
（a）无变化；（b）～（g）不同类型的尾部改变，灰色区域表示尾部膨胀
本方法用于了解精子膜的完整性，为弱精子症和死精子症的病因分析提供参考。
2）染色试验
a．伊红Y（Eosin Y）染色：精子死后，膜的通透性改变，伊红Y染料可以渗入，使精子染成红色，而活精子则不被染色。
b．伊红－苯胺黑染色：原理同精子伊红Y染色，苯胺黑形成的黑色背景使死活精子的染色差异更容易观察。
c．荧光染色：本方法利用不同荧光染料的生物学特性，花菁类染料（transgreen，SYTO及SYBR等）能穿过活细胞膜而与活精子DNA结合，发绿色荧光；而菲啶类染料（碘化丙啶、溴乙锭等）虽不能穿过活细胞膜，但能穿过膜通透性已发生改变的死精子，发红色荧光。将2种染料复合染色精子约20分钟后，于荧光显微镜或流式细胞仪中观察绿色精子（活精子）在所有被测精子中的比例，就可知道精子的存活率。本法准确、灵敏，且适合高通量自动化操作［4］。
3．1．2．3 附性腺功能的生化测定
（1）前列腺的分泌功能
1）精浆锌定量检测
5－Br－PAPS＋Zn2＋→5－Br－PAPS－Zn复合物，其吸收光波长为560nm。
正常参照值：一次射精≥2．4μmol
临床意义：精浆锌主要来自前列腺，与精液液化及精子活动能力有关。因此，精浆锌浓度的测定有助于了解前列腺的功能及分析精液异常的原因。
2）精浆柠檬酸定量检测
吲哚法：柠檬酸＋→吲哚复合物，吸收光波长为470nm。
参照值：一次射精≥13μmol。
吡啶法：精浆去除蛋白质后，精浆柠檬酸可与吡啶、醋酐形成胭脂红色化合物，在400nm处测定光吸收度，显色程度与柠檬酸含量呈正比。
参照值：≥10mg／1次射精
临床意义：精浆柠檬酸产生于前列腺，柠檬酸通过与Ca2＋结合，有助于射精后精液液化过程，并参与维持渗透压。患前列腺炎时，柠檬酸含量明显降低。
3）精浆酸性磷酸酶（ACP）定量检测
原理：在酸性环境下，精浆酸性磷酸酶（ACP）可使对硝基酚磷酸二钠底物产生对硝基苯酚，后者在碱性条件下形成黄色产物，于405nm处读吸光率。
正常参照值：≥200U／1次射精
临床意义：精浆中的酸性磷酸酶是由前列腺分泌的，酸性磷酸酶活力的高低反映了前列腺的功能。酸性磷酸酶活力低，提示前列腺功能低下；酸性磷酸酶活力过高，则是前列腺功能亢进。因此，酸性磷酸酶活力测定可以作为前列腺功能判断以及前列腺癌和前列腺增生的辅助诊断方法之一。
（2）精囊腺的分泌功能
精浆果糖定量分析如下：
原理：果糖在酸性环境中加热后与间苯二酚形成红色化合物，该有色物质在410nm波长处有最大吸收峰，其吸光度大小与果糖含量呈正比。
正常参照值：1～5g／L
临床意义：精囊分泌的果糖是精子能量的主要来源。精囊是雄激素－睾酮的靶器官，睾酮浓度影响精囊果糖的分泌，因此果糖含量能间接反映睾丸间质细胞分泌睾酮的能力。先天性精囊缺如者的果糖含量为零；精囊腺炎时，果糖含量降低。
（3）附睾的分泌功能
1）精浆中性α－葡糖苷酶活性检测：硝基酚－α－D－吡喃葡萄糖苷（PNPG）底物在中性α－葡糖苷酶的作用下水解释放出对硝基苯酚，于405nm读取光吸收值。
正常参照值：每次射精≥20mU。
临床意义：中性α－葡糖苷酶可以催化α－1，4－糖苷键水解反应，是附睾的特异性酶和标志性酶，可作为附睾的功能性指标，也可用于梗阻性无精子症和生精功能障碍性无精子症的鉴别诊断。在反映附睾功能失调方面，中性α－葡糖苷酶较左旋肉碱和甘油磷酸胆碱更特异、更敏感。
2）精浆左旋肉毒碱测定：在肉毒碱酰基转移酶催化下，肉毒碱和乙酰辅酶A反应生成肉毒碱和辅酶A。辅酶A和5′，5′－二硫－2－硝基苯甲酸（DTNB）作用生成黄色产物，于412 nm处比色。其颜色的深浅与辅酶A含量呈正比。
正常参照值：239．56±105．59μmol／L。
临床意义：左旋肉毒碱是反映附睾功能状态的指标之一。如果肉毒碱含量低于正常值，说明附睾功能下降，提示存在附睾病变，或者附睾发育不良，或者为输精通道梗阻。
（4）精液其他特殊检查：尽管常规精液分析可以对男性的生育状况进行评估，但常规分析毕竟不能等同于生育力检测，不能检测精子使卵子受精的潜能，也不能评估精子获能必需的成熟过程。因此，有关精子功能的检查在此也作一些简要的介绍。
1）诱发顶体反应测定
原理：使用钙离子载体A23187（或黄体酮）处理精液，诱导钙离子进入精子细胞，使其发生顶体反应，使偶联荧光染料的豌豆凝集素（PSA）不能与顶体膜糖蛋白特异性结合，只有无顶体反应的活精子或死精子能被荧光染色。
正常参照值：＞75%。
临床意义：顶体反应是精子与卵子透明带结合之后，精子顶体发生的一系列结构变化，导致顶体释放的蛋白水解酶溶解卵周围透明带和放射冠，精子才能顺利进入卵完成受精。本法可用于评价获能精子发生顶体反应的能力，并预测IVF的成功率。
2）精子与人卵透明带结合试验
原理：精子与透明带结合的过程会启动顶体反应，最终使精子能穿透透明带进入卵子，因此这个过程对生育极为重要。IVF授精失败的夫妇有时就是因为精子未能结合透明带。目前人卵的主要来源是IVF／ICSI受精失败的卵子。文献报道有几种不同的试验方法，一般使用的是精子与透明带竞争结合方法。该方法是把生育力正常男子的精子标记红色荧光，把患者精子标记绿色荧光，再把同样数量的活动精子混在一起，与4～5个人卵培养，患者精子与正常生育男子精子结合率用作测定指标。
正常参照值：如果患者精子与正常生育力男性的精子结合数相当，即表示正常。
临床意义：透明带结合试验可用于男性不育的病因分析，或为IVF体外受精成功率预判提供分析数据。
3）去透明带仓鼠卵母细胞试验
原理：精子－仓鼠卵穿透试验（sperm penetration assay，SPA）是利用获能后的精子具有穿透无透明带仓鼠卵的功能，将待检精子与去除透明带的仓鼠卵放在一起孵育。根据穿透卵子的精子数（膨大的精子头）来判断精子的受精能力。
计算方法及参照值范围：测定每个卵母细胞中穿入的精子数，结果以每个卵母细胞中穿入精子的平均数表示，数值越大说明精子的受精能力越强。
临床意义：SPA是评估精子功能的一个重要方法。它可以比较完整地反映精子获能、顶体反应、精卵结合以及雄原核形成的能力，对于原因不明的男性不育症的诊断具有一定的意义。
4）精子成熟度和DNA损伤的测定：精子核未成熟或DNA损伤的精子会导致受精失败或影响受精卵胚胎的正常发育。文献报道测定精子核成熟和DNA损伤的方法很多，有吖啶橙（acridine orange，AO），AO染色后用显微镜或流式细胞仪测定，TUNEL和COMET ASSAY等，目前应用最广泛的还是AO染色，Evenson把该方法定名为精子DNA结构测定（sperm chromatin structure assay，SCSA），下面以AO染色试验为例简单介绍其工作原理。
原理：保护精子核DNA的鱼精蛋白中存在大量巯基，经氧化形成二硫键，后者与精子DNA结合，维持DNA双链结构的稳定性。有些受到损伤或未成熟的精子，鱼精蛋白的巯基未被氧化，形成比较松散结构的染色质，其DNA在酸性或高温环境下会变性成单链。结构完整的双链DNA与AO结合时发绿色荧光，而在酸性条件下变性的单链DNA与AO结合时发红色荧光；通过流式细胞仪分析至少5 000个以上的精子细胞，并计算含单链DNA的精子细胞的比例，以精子DNA碎片率指数（DFI）来表示检测结果。
正常参照值：DFI≤20%为正常，≥27%～30%为异常。
临床意义：精子DNA损伤检测的目的在于了解精子的功能状态，是否适合受精。精子DNA损伤可造成受精后胚胎发育异常、流产和不育。
5）精子氧化应激试验
原理：活性氧类物质（reactive oxygen species，ROS）是细胞的正常代谢产物，当内源性和（或）外源性刺激使机体代谢异常而骤然产生大量ROS，机体即处于氧化应激状态，导致应激性氧化损伤。应用鲁米诺或荧光素（lucigenin）作为探针的化学发光过程，可用于检测ROS的生成。
正常参照值：ROS值＜100RLU／s
临床意义：已知有些医源性因素、生活方式、环境因素、局部和全身感染、自身免疫、睾丸疾病以及一些慢性病等均会导致男性精液中存在可测浓度的ROS，精液中过多的ROS会损伤精子膜，影响精子活力并破坏精子DNA，引起精子过氧化损伤和丧失精子功能［5，6］。
6）遗传和表观遗传学检查
a．精子荧光原位杂交技术：荧光原位杂交（FISH）探针是由荧光素直接标记，与特定的DNA目标区域或基因同源的DNA序列共同组成，这些探针与细胞中的DNA杂交后，能显示精子细胞核中或染色体上某一特定核苷酸序列的位置，并在荧光显微镜下显示不同的结果。
b．精子线粒体DNA的检测：精子鞭毛运动所需的能量是由尾部的线粒体鞘供应的，而精子线粒体DNA 4 977bp的部分缺失会影响精子运动能力。应用聚合酶链反应（PCR）技术检测出代表精子线粒体DNA 4 977bp缺失的部分片段，就可了解线粒体基因完整性与否。
c．精子DNA甲基化：在精子形成过程中，许多基因表达调控的主要方式是由DNA甲基化实现的。科学家普遍认为，DNA甲基化异常发生的频率要比基因突变高出近100倍。在精子中，它们甲基化的异常亦能影响胚胎发育。
检测原理：首先通过甲基化的核苷酸抗体将甲基化DNA从总的基因组DNA中分离出来。然后通过甲基化DNA芯片或高通量DNA测序技术对甲基化DNA进行分析，从而锁定甲基化出现异常的基因。
d．精子RNA检测：研究发现精子RNA表达差异，亦与精子活力和男性生育功能相关，特别是精子中特异存在的mRNA和小RNA在精卵融合和早期胚胎发育调控中有重要作用。用RNA芯片分析技术，通过比较正常生育男性与不育男性患者精子细胞中的RNA差异，可为男性不育的病因分析提供参考数据［7］。
