3．3 精液分析在流行病学研究中的注意事项
虽然精液分析有其局限性，但仍然是男性生育力流行病学研究的必要工具，至今尚无其他更好的方法能取代。每个人的精液质量可能受环境、情绪、健康状况等因素影响而存在较大波动，不能仅凭一次检测结果就确定一个人的精液质量，2～3次检测有助于获得更为可靠的基线数据。此外，精液质量易受射精频度、温度、实验室条件、检验人员的技术熟练程度、主观判断能力等诸多因素影响，其结果易发生偏差，故精液采集与分析必须严格按照适宜的标准化程序进行，尽量将每次检测控制在相同的条件下操作。从预备采精直至检测过程中对精液质量的影响因素主要包括以下几方面：
（1）采精时间：精液收集的季节对快速前向运动精子百分比、精子存活率和正常精子形态率均有影响，夏季精液质量稍差，但各研究结果并不一致［8～10］。另外，Cagnacci等的研究显示，采样时间会影响精液量，上午采样得到的精液量较多［11］。
（2）禁欲时间：禁欲时间太短会导致精液量太少、精子浓度降低；禁欲时间越长，一次排出的精子活动率及前向运动精子率越低［12，13］。精子存活率和染色体一般不会受禁欲时间延长的影响，除非附睾功能受到损害。此外，精液质量不仅受采精前的禁欲时间影响，还受倒数第2次禁欲时间的影响。因为一次射精不会将附睾完全射空，上次射精后仍会残留一些精子，这将影响到精子质量，但这种影响程度很难确定，也很少被考虑。
（3）精液样本的获取方式：与通过在家性交收集于无杀精剂的避孕套中的精液比较，手淫法获得的精液质量相对较低。
（4）精液样本收集的完全性：样本是否收集完全不仅影响精液量估计，还会影响其他指标。因为射精最初部分是富含精子的，丢失这部分将比丢失最后部分更影响精液质量的检测结果。
（5）外界温度：精液标本应保存在37℃的环境中，在液化后立即或于射精后1小时内进行检测。温度过高，精子存活率降低。液化时间与精子活力有关，液化时间越长，精子前向运动率及存活率越低［14］。从另一角度看，延长精液分析时间可筛选出真正质量好的精子，作为精子库的供精来源，也便于大批量集中筛查［15］。(https://www.daowen.com)
（6）分析时间：精液标本液化后，随着时间的延长，精子的活力、活动率均会下降，但无规律性［15］。精液样本在空气中放置时间过长，会导致脱水、pH和温度变化对活力产生负面影响。作为供给精子能量维持其活力的主要能源之一的精浆果糖，随着精液在体外存放时间的延长精子自身运动的消耗，其浓度会越来越低；精液中的丝氨酸蛋白酶活性也会发生改变，阻碍精子的运动，使精子的存活率、活动力降低［16，17］。但分析时间也受到精液自身成分的影响。精液中存在着纤溶酶原激活因子／纤溶酶系统，其含量不足或功能不全将导致精液黏稠度增高，从而使液化时间延长、pH值增高，进而影响精子存活率和活动力等［18］。
（7）分析过程中的质量控制：在精液分析中，无论样本再怎么混匀，精子难以达到完全随机分布，造成绝大多数结果精确性不足。对于精子浓度、活动力和形态的测量，都只是计算了有限精子数以反映整个样本的状况，其所导致的取样差异应是一种随机误差，通常归于计量误差。计量误差的相对大小与所检测精子数的平方根呈负相关。
1）精子浓度测量中的计量误差：精子浓度的测量是采用血球计数板来计数定量稀释精液中的精子数。假定在整个计数池中精子是随机分布的，那么在已知体积中精子的准确数量符合Poisson分布，其方差就等于所计量的精子数。如果在某计数池格内计数到了n个精子，取样的方差就是n，标准差为
，该体积精液中精子数的95%可信限约等于
。也就是说，如果计数到了200个精子，计数的标准差就是14，该体积的精液中所计量精子数的95%可信限为173～227。
2）精子活力和形态测量中的计量误差：当把精子分成两个或两个以上类别时（如“正常”或“不正常”形态，“前向性”或“非前向性”运动等），每个类别里估测百分比（p）的标准误差取决于真正的、但未知的百分率以及所计数的精子数（N）。其估测标准误差为
。因此，如果计数了200个精子且正常形态的百分率为20%，其标准误差为2．8%，95%可信限是14．5%～25．5%；如果计数400个精子，其标准误差进一步降低到2．0%，95%可信限为16．1%～23．9%。
3）最大限度降低统计学计量误差：加大精子的检测数量当然可以降低计量误差，但有得必有失，得是提高了统计精确度，而失是技术员可能因疲劳而丧失准确性，同时亦花费了更多的资源。
另外，常常会存在某些额外的误差，比如同一技术员采用同一程序来重复分析有可能产生比单纯计量误差更大的结果差异，这样的额外因素可能是样本混合不充分（常见于黏稠或凝集的样本）、技术粗糙或仪器不稳定等；由不同技术员重复测量所产生的差异可能来自系统性偏差、持续的计算误差的偏差或对形态和活力的分类标准不同等。
