16．2 精液检测过程中方法学的影响
精液质量易受射精频度、温度、实验室条件、检验人员的技术熟练程度，以及主观判断能力等诸多因素影响，其结果易发生偏差，故精液采集与分析必须严格按照标准化程序进行，将每次检测尽量控制在相同的条件下操作。从预备采精直至检测过程中对精液质量的主要影响因素包括以下几方面。
16．2．1 采精时间
多项研究显示精液质量存在季节性差异。Levine等分别在夏季和冬季对131名男性进行精液质量检测，发现夏季精子浓度和精子总数均显著低于冬季（表16．9）［8］。
表16．9 精液质量的季节性变化
注：＊P＜0．05。
Chen等对包含约400例对象的回顾数据进行分析，发现四个季节的精液质量指标有差别，冬季精子浓度高于秋季，冬季精子正常形态率高于春季和夏季（表16．10）［9］。
表16．10 精液质量的季节性变化
注：＊为四季中最大值除以最小值后减去100%。
另外，Cagnacci等对54名男性在上午7：00～7：30和下午5：00～5：30各收集一次精液，每次采样前都要求对象禁欲3～4天，检测发现下午采样得到的精液浓度、精子总数和前向运动精子率均较高（表16．11）［10］，四个指标下午较上午分别高26．68%，28．12%，27．92%和17．92%。
表16．11 精液质量的一天变化
注：＊秩和检验P＜0．05。
16．2．2 禁欲时间
江鱼等对191例正常生育力男性不同禁欲天数的精液样本进行分析，结果显示：随禁欲天数的增加，精液量增加，精子密度增高，精子存活率降低，正常形态率差异不显著（表16．12）［11］。汤洁等的研究也显示：44名健康志愿者在48小时内留取两次精液，第二次的精液量明显减少［12］。
表16．12 191例正常生育力男性不同禁欲时间的精液质量
注：＊精子密度为几何均数。
此外，精液质量不仅受采精前的禁欲天数影响，还受倒数第二次禁欲天数的影响。因为一次射精不会将附睾完全射空，上次射精后仍会残留一些精子，这将影响到精子质量，但这种影响程度很难明确，也很少被考虑。
16．2．3 精液样本的获取方式及完整性(https://www.daowen.com)
与通过在家性交收集于无杀精剂的避孕套中的精液比较，手淫法获得的精液质量相对较低［13］。
样本是否收集完全不仅影响估计精液量，还会影响其他指标。因为射精最初部分是富含精子的，丢失这部分将比丢失最后部分更影响精液质量的检测结果［14］。
16．2．4 外界温度
精液标本应保存在37℃的环境中，在液化后立即或于射精后1小时内进行检测。温度过高，精子存活率降低。液化时间与精子活力有关，液化时间越长，精子前向运动率及存活率越低［15］。从另一角度看，延长精液分析时间可筛选出真正质量好的精子，作为精子库的供精来源，也便于大批量集中筛查［16］。
16．2．5 分析时间
李文伟等采用SQA IIB系统对20份室温液化的精液样本进行2次分析，第一次为标本插入仪器后立刻进行分析，第二次为标本插入仪器3～5分钟进行分析。结果发现第二次分析的总功能精子密度、总精子密度、精子存活率、精子活力指数均明显升高，正常形态精子百分率略微升高，且差异都具有统计学意义（P＜0．01）（表16．13）［17］。
表16．13 20例精液标本两次检测结果比较
作者分析其原因可能由于仪器事先被预热，内部温度较高，第一次插入室温放置的标本，此时标本还未被加温，精子活力较差，所以各项参数均相对较低。第二次测定时，标本已放置于仪器3～5分钟，此时标本被仪器内温度预热，精子活力上升后引起一系列指标的升高。
精液液化后放置时间不同也会对检测结果产生一定的影响。马海龙对102例健康人员的精液标本经30分钟水浴液化后，分别在0分钟、10分钟、20分钟和30分钟进行测定，发现精子密度、存活率和正常形态率在10分钟时最高（表16．14）［18］；30分钟时3个指标值分别仅为10分钟时的69%，60%和35%，差别明显。邵永等的研究也显示：随着采精至分析时间的延长，精子的活力会下降，但精子密度并未见明显降低［19］。
表16．14 102例精液不同时间的分析结果
注：＊与0分钟结果比较，P＜0．05 。
精液样本在空气中放置时间过长，会导致脱水、pH和温度变化对活力产生负面影响。作为供给精子能量维持其活力的主要能源之一的精浆果糖，随着精液在体外存放时间的延长、精子自身运动的消耗，其浓度会越来越低；精液中的丝氨酸蛋白酶活性也会发生改变，阻碍精子的运动，使精子的活动力、存活率降低［20，21］。但分析时间也受到精液自身成分的影响。精液中存在着纤溶酶原激活因子／纤溶酶系统，其含量不足或功能不全将导致精液黏稠度增高，从而使液化时间延长、pH值增高，进而影响精子存活率和活动力等［22］。
16．2．6 不同精子计数方法的比较
胡毓安等比较了血细胞计数池、Makler计数池、Cell－VU计数池和CASA系统4种精子计数方法的结果，发现Cell－VU计数池与CASA系统结果差异无统计学显著性，血细胞计数池和Makler计数池结果差异无显著性；但Cell－VU计数池、CASA系统与血细胞计数池、Makler计数池结果间差异显著（表16．15）［23］。从数值看，血细胞计数池检测到的精子密度值最高，而Cell－VU计数池和CASA系统检测到的数值仅为前者的59%和55%，差别非常大。
表16．15 不同计数方法检测55例的结果
注：＊字母不同代表两组差异有显著性。
由于精液具有一定的黏稠度，无论标本怎样混匀，都不可能使精子完全随机分布，这是导致计数结果变异或精确性不足的主要原因之一。CASA检测法在计数时可选择不同的视野进行，一定程度上克服了这种不均匀性，而且CASA计数时可以把精液压成单层，误差可能会小些。
