2 实验结果

图12 热应激后αB-crystallin基因表达的原位杂交结果

图13 甲苯胺蓝-ATPase染色的肌纤维类型及对应的相邻切片HSP70免疫荧光染色照片，以及热应激对HSP70呈肌纤维类别特异性表达的影响

A图为甲苯胺蓝染色的肌纤维类别照片;

B图为A图转换成黑白照片后的图像，其中黑色为I型纤维，灰色为IIa型纤维，灰白色为IIb型纤维;

C图为相邻切片的HSP70免疫荧光染色照片，其视野与A图相对应。绿色荧光为HSP70阳性表达，从图中可见HSP70呈肌纤维类别特异性分布，结合Locke和Neufer等用ATP酶染色区分HSP70呈肌纤维类别分布所获得的结果[1]，[2]，[3]，认定HSP70在I型和Ⅱa型肌细胞的胞浆中分布较多(绿色荧光)，Ⅱb型肌纤维中没有分布 (没有绿色荧光);

D图为热应激后即刻发现HSP70分布在所有肌细胞的细胞膜上 (绿色荧光)，而细胞浆中分布较少，热应激使HSP70呈肌纤维类别特异性分布的规律被打破，Ⅱb型肌细胞的细胞膜上也有大量的HSP70存在。正常大鼠HSP70只分布在I型和Ⅱa型肌纤维的细胞浆中，而热应激后HSP70分布于所有肌纤维的细胞膜，可能对预防细胞膜损伤，尤其是Ⅱb型肌纤维的细胞膜损伤起到保护作用。

图14 热应激对HSP70亚细胞分布的影响

A-D图表示HSP70在纵切面内的分布，E-H图表示HSP70在横断面内的分布。A、E图为不加一抗，只加二抗阴性对照，B、F图为正常对照， C、G图为热应激后即刻，D、H为热应激后24h。从图中可见，安静状态下HSP70在细胞浆有低水平表达，并且只分布在I、Ⅱa型肌纤维，热应激后即刻HSP70表达增加并且发生移位变化，分布于所有肌细胞的细胞膜和细胞核，24h后HSP70在细胞膜和细胞核仍有大量分布。

图15 热应激对a B-crystallin亚细胞分布的影响

A-D图表示a B-crystallin在纵切面内的分布，E至H图表示a B-crystallin在横断面内的分布。A、E图为不加一抗，只加二抗阴性对照，B、F图为正常对照，C、G图为热应激后即刻，D、H为热应激后24h。从图中可见，安静状态a B-crystallin在细胞浆有一定水平的表达，主要分布于胞浆及膜下。热应激后即刻a B-crystallin表达增加并且发生移位变化，从纵切面发现a B-crystallin主要存在于胞浆和Z线，从横断面发现a B-crystallin主要存在于细胞膜附近，24h后a B-crystallin在细胞膜和Z线仍有大量分布。

图16 热应激后即刻腓肠肌αB-crystallin和HSP70在细胞内分布对比 (纵切面)

图A表示热应激后即刻αB-crystallin在大鼠腓肠肌纵切面内的表达情况。从图中可见热应激后αB-crystallin从胞浆中移位于肌纤维内部的Z线附近 (箭头所指绿色荧光)，一部分仍留在细胞浆中 (绿色荧光)。

图B表示热应激后HSP70在腓肠肌纵切面内的表达情况，从图中可见热应激后HSP70从细胞浆移位于细胞膜，主要分布在所有肌细胞的细胞膜和细胞核上 (绿色荧光)，而胞浆中没有分布。

图17 热应激后即刻腓肠肌αB-晶状体蛋白和HSP70在细胞内分布对比 (横断面)

图A表示热应激后即刻αB-晶状体蛋白在大鼠腓肠肌横断面内的表达情况。从图中可见热应激后αB-晶状体蛋白从细胞浆移位于细胞膜，主要分布在部分肌纤维的细胞膜上 (绿色荧光)。

图B表示热应激后HSP70在腓肠肌横断面内的表达情况，从图中可见热应激后HSP70从I型和Ⅱa型肌纤维胞浆移位于细胞膜，分布在所有肌细胞的细胞膜和细胞核上 (绿色荧光)，在部分肌细胞的胞浆中也有分布(绿色荧光)。