Rosa-Cre和Rosa-CreER

Cre的表达可通过Rosa26报告子 (R26R)加以验证。在R26报告小鼠中，β-半乳糖苷酶 (β-gal)基因前的终止信号两侧各有一个loxP位点。因此，只有当Cre表达时，终止信号被敲除，β-gal基因才得以表达［8］(图2-1)。在双转基因小鼠中 (同时转基因表达Cre和R26R)，表达Cre的细胞也同样表达β-gal基因，从而可通过X-gal组织染色来确认Cre表达的细胞特异性。X-gal组织染色检测Cre的活性一方面要求特殊的组织处理方法用以保存酶活性，另一方面要求解决组织背景染色这一技术难题。基于这些技术问题，近几年绿色荧光蛋白 (GFP)报告模型被用于Cre的检测，将GFP基因嵌入Cre转基因载体中，则绿色荧光染色阳性组织即为Cre阳性表达［9］。

图2-1　Cre可使R26R中的β-gal基因得以表达，从而被X-gal染色识别

为了能够在空间和时间上更为精确地控制Cre的活性，从而在胚胎发育及出生后的特定时间可以精准地敲除位于loxP位点内的等位基因，一种依赖于配体的嵌合Cre重组酶得到了应用［10］。法国法兰西公学院伊尔基希遗传与细胞分子生物学研究所的Feil等人率先在人源雌激素受体的配体结合区 (LBD)形成三个碱基突变 (G400V/M543A/L544A)，使之不能与内源性雌激素结合，但能与雌激素受体的人工合成配体——他莫昔芬 (Tamoxifen)结合，再将Cre重组酶的一段融合多肽序列和突变的雌激素受体的配体结合区嵌合，从而使得他莫昔芬能够激活Cre重组酶而启动Cre重组功能。如图2-2所示，在Rosa-CreER小鼠中，Rosa26位点可调控他莫昔芬诱导的Cre-ER融合蛋白。也即是说，Rosa-CreER小鼠中的β-gal基因只有经他莫昔芬诱导方能启动［8］。

图2-2　Rosa-CreER小鼠中的β-gal基因只有经他莫昔芬诱导方能启动