（三）方法

实验开始前配制新鲜的免疫乳液 (图5-3)。

1.免疫小鼠

(1)麻醉小鼠。(注释4、5)

(2)70%乙醇消毒注射部位皮肤，使用1mL注射器和27号针头，在鼠尾进行皮内注射。距鼠尾根部2cm处进针至皮内，针头向鼠尾根部前进，至鼠尾根部0.5cm处注射免疫乳液。每只小鼠注射0.1mL的免疫乳液。注射部位如图5-4所示。(注释6、7)

图5-3　免疫乳液的配制

将一滴配制好的免疫乳液滴至水面，如果乳液不化开，说明黏稠度合适。

图5-4　注射部位

距鼠尾根部2cm处进针至皮内，针头向鼠尾根部前进，至鼠尾根部0.5cm处注射免疫乳液。箭头，指示鼠尾根部

(3)如果实验需要，可于第一次注射14天后进行第二次免疫注射 (注释8)。注射药量和注射方法同第一次注射。注射部位可位于第一次注射位点的稍前方，以避开因第一次免疫注射所导致的皮肤炎症。

2.关节炎的评价 在第一次免疫注射后14天开始，每日监控小鼠类风湿关节炎的发生发展并且给予关节炎临床评分 (图5-5)。C57BL/6小鼠的关节炎常在第一次免疫注射后3～6周发生。(https://www.daowen.com)

图5-5　胶原诱导C57BL/6J小鼠关节炎的评分

A.正常后爪，临床评分0；B.轻度肿胀，临床评分1；C.中度肿胀，临床评分2；D.重度肿胀伴关节僵硬，临床评分3

(1)抓住小鼠后颈处皮肤，利用游标卡尺测量小鼠前爪和后爪的肿胀程度。游标卡尺应测量手掌或脚掌的中心位置。

(2)图5-5显示了正常和类风湿关节炎后爪的临床评分：0=正常，1=轻度肿胀，2=中度肿胀，3=重度肿胀伴关节僵硬。(注释9)

(3)每个爪子分别进行评分，每只小鼠最多可获得12分。(注释10)