二、灰分的测定
（一）分析意义
种子灰分（即种子体内无机盐或矿物质的含量），对作物体内的代谢起着很大的作用，一般种子中矿物质含量要比绿色体内的含量低，禾谷类种子中灰分为1.5%～3.0%，而豆类，特别是大豆籽粒中的含量，则高达5%左右。
种子体内的矿物质，分布极不平衡，胚和种皮内的灰分要比胚乳高很多倍。灰分的组成主要有P、Na、K、Ca、Cl、Fe、Mg、S、Mn、Si等多种元素。这些元素对农作物生长发育都有重要作用。例如，镁盐和铁盐同形成幼嫩植物体中的叶绿素有关，硫是构成蛋白质中的胱氨酸和谷胱甘肽的主要成分，而锰对作物生长则有刺激作用。
种子体内各种矿物元素的含量相差悬殊，如磷在小麦灰分中达49.3%，而碘的含量只有6×10-9。各作物种子中的矿物质含量可见表5.18。
表5.18 各种作物种子的矿物质（灰分）含量（%）
通常，种子中含纤维素最多的部位，矿物质含量也多。含灰分率不但与品种有关，而且与土壤类型及施肥情况也有密切关系。对种子灰分进行测定，既可查明各种农作物种子体内矿物质含量及分布情况，又能为改良施肥条件，实现农作物稳产高产提供科学依据。
（二）方法选择
种子灰分的测定，一般有多种。下面仅介绍干灰化法和湿灰化法。
1.干灰化法
（1）方法原理：
种子样品在高温下灼烧灰化，其有机化合物氧化成二氧化碳和水挥发掉，剩下不能燃烧的部分即为矿物质元素的化合物，其总量称为总灰分。
（2）主要仪器：
分析天平（感量0.0001g）；
高温可控电炉；
瓷坩埚及坩埚钳（25mL）；
可调变压器。
（3）测定步骤：
①将洗净的坩埚写好编号，置于600℃高温炉中灼烧30 min，待炉温降至200℃时，移入干燥器中，冷至室温后，准确称取坩埚质量（W1），必要时再灼烧、冷却、称量，至质量恒定为止。
②在已知质量坩埚中，放入磨碎、混匀、过1 mm筛的风干样品2～5g（准确到0.0001g），同时取2～5g，按130℃快速烘干法测定水分，然后把坩埚放在电炉上，倾斜盖上盖子，用调压器调节电压，使温度由低到高，直至样品灰化呈灰白色为止。再将其放入高温电炉内，加热到550℃，继续灼烧1h。取出后，放入干燥器中，冷却至室温后称量。
③再将坩埚放入高温电炉中灼烧30 min，冷却，称量（W2），直至质量恒定，两次质量之差不大于0.005 g。
（4）结果计算：(https://www.daowen.com)
式中 W1——空坩埚质量，g；
W2——坩埚与灰分总质量，g；
W——风干样品质量，g；
——水分系数。
注释：
①新坩埚及盖可用FeCl3，也可用蓝黑墨水（墨水中也含0.5% FeCl2·6H2O）的混合液编写号码，灼烧后，即留下不易脱落的红色Fe2O3痕迹。
②样品的粉碎度不宜过细，以免燃烧时飞失，样品应疏松地装入坩埚中，容易氧化完全。
③也可用煤气灯或酒精灯焦化样品。将盛有样品的坩埚斜放在泥三脚架上，半盖坩埚盖，用小火加热，使样品在通风条件下炭化。
④用过的坩埚可用粗盐酸或废盐酸浸泡10～20 min后，再用水洗刷干净。
2.湿灰化法
（1）方法原理：
同干灰化法。
（2）主要仪器：
同干灰化法。
（3）试剂配制：
醋酸镁溶液［（CH3COO）2Mg］：取15 g醋酸镁，溶解于1L酒精中，放置过夜。若溶液浑浊需过滤。
（4）测定步骤。
①称取粉碎混匀的样品2～3g，放入已编好号码、质量恒定的坩埚中，用吸管加入3 mL醋酸镁溶液，将样品全部湿润。小心用火点燃样品（用棉花蘸酒精燃之），蒸去酒精。然后把坩埚置于电炉上，用调压器控制电压进行低温加热，使样品缓慢炭化至无烟为止。
②把坩埚转入马福炉中，550～600℃灼烧半小时，使灰烬成松状灰白色。如有黑点，要继续灼烧。灼烧后，将坩埚放入干燥器中，冷却后称量，直至质量恒定。
③同时进行空白试验，在已知质量的坩埚中加3 mL醋酸镁溶液，按上述操作蒸去酒精，然后放入550～600℃马福炉中灼烧半小时，冷却，称量，减去空坩埚质量，即为醋酸镁灼烧后的灰分（氧化镁）质量。