病理学的诊断和研究方法

四、病理学的诊断和研究方法

(一)人体病理学研究方法

1.尸体解剖检查 简称尸检(autopsy),是病理学基本研究方法之一,是对死者遗体进行病理解剖及系统的形态学分析。其目的在于:①确定诊断、查明死因。协助临床总结在诊断和治疗过程中的经验和教训,有利于提高医疗质量和诊治水平;②接受和完成有关医疗事故鉴定,明确责任;③及时发现和确诊某些传染病、地方病和新发生的疾病,为防疫部门采取防治措施提供依据;④积累国人各种疾病的人体病理材料,作为深入研究和防治这些疾病的基础;⑤收集各种疾病的病理标本,供病理学教学使用。目前我国的尸检率很低,不利于病理学和医学的发展,亟待相关立法的出台予以改善。

2.活体组织检查 简称活检(biopsy),采用钳取、穿刺、局部切取或刮除、治疗性手术摘除等方式,获取患者的病变组织或器官进行病理诊断的方法。其目的在于:①及时准确地对疾病做出病理诊断,指导治疗和评估预后;②必要时还可在手术中作冷冻切片快速诊断,为术者选择术式提供依据。活检虽然取材新鲜,但受到取材的准确性和可行性的限制。

3.细胞学检查 细胞学检查(cytology)又称脱落细胞学,是指采集病变处脱落或细针吸取的细胞,涂片染色后进行病理诊断。其优点是方法简单、患者痛苦小,可重复,适合大样本人群普查。缺点是没有组织结构,细胞分散且常有变性,可能会出现假阴性的结果,有时需要进行活检进一步证实。

国外把尸体解剖检查(autopsy)、活体组织检查(biopsy)和细胞学检查(cytology)喻为病理科室和病理医生的“ABC”,这三种检查主要通过肉眼的大体观察和光学显微镜的形态学观察进行综合分析,最后做出病理诊断。

(二)实验病理学研究方法

1.动物实验 动物实验(animal experiment)是利用适宜的动物制作出人类某些疾病的动物模型,从而探讨疾病的病因、发生发展规律及转归的一种方法。其优点是任意性很强,可根据主观设计进行研究,如转基因动物模型、致癌动物模型、药物实验等,可以弥补人体病理学研究的限制和不足。缺点是动物与人体之间存在着物种差异,不能把动物实验的研究结果不加分析直接地套用于人体,仅可作为研究人体疾病的参考。(https://www.daowen.com)

2.组织和细胞培养 组织和细胞培养(tissue and cell culture)是指从人体或动物体内获取的某种组织或细胞用适宜的培养基在体外进行培养,研究某种因素对这种组织或细胞的形态结构和功能的影响,用以揭示其致病机制。优点是体外培养条件单纯,容易控制,可以避免体内复杂因素的干扰,且周期短,见效快。缺点是单一恒定的体外环境与复杂变化的体内环境存在着很大差别,故不能将体外研究结果与体内过程等同看待。

(三)病理学观察方法

病理学最基本观察方法是大体和光学显微镜观察,其次是电子显微镜观察。

1.大体观察 又称肉眼观察,主要是用肉眼或辅之以放大镜、尺、秤等工具,对大体标本及其病变性状(大小、形状、重量、色泽、质地、界限、表面和切面形态、位于器官什么部位,以及与周围组织和器官的关系等)进行细致的解剖、观察、测量、取材和记录,必要时可摄取影像留作资料。大体观察可见到病变的整体形态和所处的某一阶段,是病理医师的基本功和做出正确病理诊断的第一步,也是医学生学习病理学的主要方法之一。

2.光学显微镜观察 取病变处组织或细胞,制成石蜡或冰冻切片,或细胞学涂片,经不同的方法进行染色,用光学显微镜(简称光镜)观察,通过综合分析病变的组织和细胞特点,可做出疾病的病理诊断。苏木素-伊红(HE)染色法组织切片仍然是迄今为止最常用的诊断和研究疾病的基本方法。如仍不能做出诊断,需要辅以特殊染色和新技术。特殊染色是应用某些能与组织或细胞内化学成分进行特异性结合的显色试剂,显示组织细胞内某些化学成分(如蛋白质、酶类、核酸、糖原、脂肪等)的变化。如用高碘酸-希夫(PAS)染色法显示细胞内糖原的变化,用苏丹Ⅲ或油红O染色法显示脂肪或细胞内脂肪滴等,以辅助做出病理诊断。免疫组织化学技术是利用抗原与抗体可以特异性识别结合原理,应用标记的已知抗体在光镜或电镜下检查组织细胞内是某种蛋白抗原的定性、定位及相对定量,用以辅助病理诊断和鉴别诊断、分类和指导治疗及科学研究。原位杂交技术是利用核酸分子互补序列之间可以特异性识别结合的原理,应用标记的已知序列核酸探针,通过在组织切片或细胞涂片(爬片)上进行杂交,在光镜下检查组织细胞内某种基因的定性、定位及相对定量,用以辅助病理诊断和鉴别诊断、分类和指导治疗及科学研究。

3.电子显微镜观察 电子显微镜简称电镜,分为透射电镜观察和扫描电镜观察。透射电镜观察是利用电子束衍射原理,通过戊二醛和锇酸的双重组织固定、制作超薄组织切片,进行重金属盐(醋酸铀或枸橼酸铅)染色,在电子显微镜下观察细胞膜、细胞质内各种细胞器及细胞核的微细结构变化,即亚细胞结构。扫描电镜观察是利用上述原理以及固定、染色方法,在电子显微镜下观察细胞或组织表面的微细结构变化。