2.1.5　RNAi技术

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RNAi（RNA interference）又名转录后的基因沉默（post transcriptional gene silencing，PTGS），指的是利用双链RNA（dsRNA）诱导基因沉默的方法。真核生物体内有3种小RNA能够靶向到基因的转录本，其中包括siRNA（small interfering RNA）[94]。在体外合成或人工插入的外源基因转录形成的双链RNA会在RNAseⅢ核酸酶dicer的作用下被切割成20～25核苷酸大小的小分子干扰RNA片段，并与核酸内切酶AGO等蛋白形成的RNA诱导沉默复合物（RNA-induced silencing complex，RISC）结合，形成单链，靶向到目标m RNA，使其特异性地降解，从而达到转录后调节目标基因表达的目的（图2-3）。

RNAi机制在物种中有很高的保守性，如线虫、果蝇和拟南芥等。利用该技术科学家已成功建立了多个全基因组范围的果蝇RNAi库[95]，极大地推动了果蝇基因的体内功能研究。将RNAi技术与Gal4/UAS系统及MARCM系统结合，我们不但能够在特定时间、特定组织高效且简便地沉默目标基因，从而研究其在发育过程中或不同疾病模型中所起到的生理学功能；还能用不同模型进行全基因组范围的大规模的RNAi遗传筛选，以便找到已知信号通路的新成分或影响某些特定疾病的新基因，最终为治疗人类相关疾病提供线索和可能的药物靶点。

图2-3　siRNA沉默基因表达示意图^[1]

本文所用的RNAi品系来自Vienna Drosophila RNAi center及Bloomington stock center。