母种制作、使用中的异常情况及原因分析
若母种制作过程中培养基灭菌后凝固不良，甚至不凝固。可以按照以下步骤分析原因：
1）先检查培养基组分中琼脂的用量和质量。
2）如果琼脂没有问题，再用pH试纸检测培养基的酸碱度，看培养基是否过酸，一般pH低于4.8时会凝固不良；当需要较酸的培养基时，可以适当增加琼脂的用量。
3）灭菌时间过长，一般在0.15MPa条件下超过1h后易凝固不良。
【提示】 如果以上都正常，还要考虑称量工具是否准确，有些小市场买的称量工具不是很准确。建议到正规厂家或专业商店购买称量工具。
2.母种不萌发
若母种接种后，接种物一直不萌发，其原因有以下几种：
1）菌种在0℃甚至以下保藏，菌丝已冻死或失去活力。检测菌种活力的具体方法是：如果原来的母种试管内还留有菌丝，再转接几支试管，培养观察，最好使用和上次不同时间制作的培养基。如果还是不萌发，表明母种已经丧失活力。如果第二次接种物成活了，表明第一次使用的培养基有问题。
2）菌龄过老，生命力衰弱。
3）接种操作时，母种块被接种铲、酒精灯火焰烫死。
4）母种块没有贴紧原种培养基，菌丝萌发后缺乏营养死亡。
5）接种块太薄太小干燥而死。
6）母种培养基过干，菌丝无法活化，菌丝无法吃料生长。
3.发菌不良
母种发菌不良的表现多种多样，常见的有生长缓慢、生长过快但菌丝稀疏、生长不均匀、菌丝不饱满、色泽灰暗等。
母种发菌不良的主要原因：培养基是否干缩，菌丝是否老化，品种是否退化等；培养温度是否适宜；棉塞是否过紧；空气中是否有有毒气体。培养基不适、菌种过老、品种退化、培养温度过高或过低、棉塞过紧透气不良、接种箱中或培养环境中残留甲醛过多都会造成菌种生长缓慢，菌丝稀疏纤弱等发菌不良现象。(https://www.daowen.com)
4.杂菌污染
在正常情况下，母种杂菌污染的概率在2%以下。但有时会造成大量杂菌污染的情况，其原因如下：
1）培养基灭菌不彻底：灭菌不彻底的原因除灭菌的各个环节不规范外，还包括高压灭菌锅不合格的原因。
2）接种时感染杂菌：其原因有接种箱或超净工作台灭菌不彻底（含气雾消毒剂不合格、紫外线灯老化）；接种时操作不规范等原因。
3）菌种自身带有杂菌：启用保藏的一级种，应认真检查是否有污染现象。如果斜面上呈现明显的黑色、绿色、黄色等菌落，则说明已遭真菌污染；将斜面放在向光处，从培养基背面观察，如果在气生菌丝下面有黄褐色圆点或不规则斑块，说明已遭细菌污染，被污染的菌种绝不能用于扩大生产。
5.母种制作及使用过程中应注意的事项
1）培养基的使用：制成的母种培养基，在使用前应做无菌检查，一般将其置于24℃左右恒温箱内培养48h，证明无菌后方可使用。制备好的培养基，应及时用完，不宜久存，以免降低其营养价值或其成分发生变化。
2）出菇鉴定：投入生产的母种，不论是自己分离的菌种或由外地引入的菌种，均应做出菇鉴定，全面考核其生产性状、遗传性状和经济性状后，方能用于生产。若母种选择不慎，将会对生产造成不可估量的损失。
3）母种保藏：已经选定的优良母种，在保藏过程中要避免过多转管。转管时所造成的机械损伤，以及培养条件变化所造成的不良影响，均会削弱菌丝生命力，甚至导致遗传性状的变化，使出菇率降低，甚至造成菌丝的“不孕性”而丧失形成子实体的能力。因此引进或育成的菌种在第一次转管时，可较多数量扩转，并以不同方法保藏，用时从中取一管大量繁殖作为生产母种用。一般认为保藏的母种经3～4次代转，就必须用分离方法进行复壮。
4）建立菌种档案：母种制备过程中，一定要严格遵守无菌操作规程，并标好标签，注明菌种名称（或编号）、接种日期和转管次数，尤其在同一时间接种不同的菌种时，要严防混杂。母种保藏应指定专人负责，并建立“菌种档案”，详细记载菌种名称、菌株代号、菌种来源、转管时间和次数，以及在生产上的使用情况。
5）防止误用菌种：从冰箱取出保藏的母种，要认真检查贴在试管上的标签或标记，切勿使用没有标记或判断不准的菌种，以防误用菌种而造成更大的损失。
6）母种选择：保藏的母种菌龄不一致，要选菌龄较小的母种接种；切勿使用培养基已经干缩或开始干缩的母种，否则会影响菌种成活或导致生产性状的退化。
7）菌种扩大：保藏时间较长的菌种，菌龄较老的菌种或对其存活有怀疑时，可以先接若干管，在新斜面上长满后，用经过活化的斜面再进行扩大培养。
8）防止污染：保藏母种在接种前，应认真地检查是否有污染现象。若斜面上有明显绿、黄、黑色菌落，说明已遭受真菌污染；管口内的棉塞，由于吸潮生霉，只要有轻微振动，分生孢子很容易溅落到已经长好的斜面上，在低温保藏条件下受到抑制，很难发现；将斜面放在向光处，从培养基背面观察，在气生菌丝下面有黄褐色圆形或不定形斑块，是混有细菌的表现。已经污染的母种不能用于扩大培养。
9）活化培养：在冰箱中长期保藏的菌种，自冰箱取出后，应放在恒温箱中活化培养，并逐步提高培养温度，活化培养时间一般为2～3天。如果在冰箱中保存时间超过3个月，最好转管培养一次再用，以提高接种成功率和萌发速度。
【注意】 保藏的菌种，不论任何情况下都不可全部用完，以免菌种失传，对生产造成损失。
10）菌种保存：认真安排好菌种生产计划，菌丝在斜面上长满后立即用于原种生产，能加快菌种定植速度。如果不能及时使用，应在斜面长满后，及时用玻璃纸或硫酸纸包好，置于低温避光处保存。
