呼吸道感染细菌的微生物学检查及防治原则
（一）微生物学检查
1.标本采集 根据感染部位的不同，可采集不同的标本。如疑似肺结核、肠结核、肾与膀胱结核、结核性脑膜炎患者分别取痰、大便、尿、脊液等。因标本含菌较少，可先浓缩集菌，以提高检测的阳性率。有杂菌的标本需经4%氢氧化钠、3%盐酸或6%核酸处理30分钟，既可杀死杂菌，又能溶解痰标本中的黏稠物质，然后离心沉淀，用沉淀物作涂片染色镜检。若要培养或动物接种，宜先将沉淀物中的酸或碱中和。脑脊液或无杂菌的胸腹水可直接离心沉淀集菌。
麻风患者可从眶上、颚下、下颌、耳郭及鼻黏膜等处无菌切开表皮，达真皮后用刀刮取组织液涂片镜检。
白喉患者可用无菌棉拭取假膜或其边缘分泌物，无假膜的可疑患者取鼻咽部、扁桃体黏膜分泌物。用于培养的标本，应于抗菌药物应用前取材。不能及时送检的标本，应浸入无菌生理盐水中保存。
流感嗜血杆菌感染可根据部位采集痰、脑脊液、鼻咽分泌物及脓液等标本。
肺炎克雷伯菌感染可采集呼吸道分泌物等标本。
2.形态学检查 结核的诊断直接涂片镜检是简易、快速的方法，取标本直接厚膜涂片或集菌后涂片，用抗酸染色、镜检，如找到抗酸杆菌，结合临床症状，可初步诊断。
麻风目前主要诊断方法为涂片检查，抗酸染色后镜检，麻风杆菌呈红色，细胞呈蓝色。也可用金胺染色后荧光显微镜检查，或用免疫荧光法检查。
白喉的诊断分别用革兰染色和Albert染色镜检，根据细菌形态、染色性、排列及异染颗粒等特征，做出初步诊断。
嗜肺军团菌感染的诊断可取痰、气管分泌物、血或肺活检组织等标本，用荧光抗体染色法和Dieterle镀银染色镜检。经分离培养、鉴定可进一步确诊。
3.分离培养与鉴定 分离培养与鉴定是病原学诊断的主要方法，将经集菌处理的沉淀物，接种于固体培养基上，37℃培养，每周观察生长情况，通常3～4周长出肉眼可见的粗糙菌落，但有时需延长至6～8周。根据细菌生长繁殖的速度、菌落特点及抗酸染色结果鉴定，或进行分型和药敏试验。也可将标本接种于液体培养基中，5～7天取沉淀物涂片染色镜检，获结果较快，有助于治疗。
白喉患者可将标本接种于吕氏血清斜面，经37℃培养12～18小时，挑取灰白色菌落涂片镜检、作毒力试验等进一步鉴定确诊。
百日咳的诊断以细菌分离培养为主，可取病人卡他期鼻咽拭子或咳碟法作细菌分离培养，根据菌落形态，涂片染色镜检做出初步诊断。分离阳性率可达91.5%，而恢复期仅有约26%。确诊可作血清玻片凝集或免疫荧光染色。
流感嗜血杆菌感染的诊断可将标本接种于巧克力色培养基上，经37℃培养24～48小时，根据菌落形态、卫星现象、生化反应及荚膜肿胀试验等予以确诊。
肺炎克雷伯菌的分离培养多使用商品化微量生化反应系统，根据各种菌生化特点进行鉴定。
4.其他检查法
（1）快速诊断：目前聚合酶链反应（PCR）技术已用于结核分枝杆菌的鉴定，每毫升标本中几个细菌即可获阳性结果。但应注意排除假阳性和假阴性结果。
嗜肺军团菌感染的诊断直接免疫荧光抗体法（DFA）：取呼吸道分泌物标本，用荧光素标记的抗军团菌抗体直接与标本作用后观察细菌形态，优点是简便、快速，2小时内可出结果，特异性好；缺点是敏感性低。单克隆抗体应用于DFA与多价血清相比，特异性及敏感性均增高。聚合酶链反应技术也可用于嗜肺军团菌感染的诊断。(https://www.daowen.com)
（2）血清学试验：以结核分枝杆菌纯蛋白衍生物（PPD）作为已知抗原，用ELISA测定等检标本（脑脊液、血液或胸腹水）中的抗体，明显增高者有助于活动性结核病的诊断。
近年研究证明，各类型结核患者在40%左右的标本中可分离出结核分枝杆菌L型。经治疗的患者标本中，结核杆菌消失，L型可持续存在。空洞型患者痰中查不出L型菌亦可作为判断活动性结核的标准之一。标本中查不出结核分枝杆菌细菌型与L型菌时，才能诊断为阴性。
百日咳杆菌的感染也可用免疫荧光抗体法、ELISA、微量凝集试验检测特异性抗体（IgG和IgM），恢复期抗体滴度升高达急性期4倍或以上，且滴度达1∶128时可判为阳性。
（3）毒力试验：毒力试验是鉴别白喉棒状杆菌与其他棒状杆菌的重要方法。常用方法有体外和体内两类。体外法常用Elek平板试验和SPA协同凝集试验。体内法常用豚鼠作中和试验。
（二）防治原则
1.预防 控制结核病主要通过及时发现和治疗痰菌阳性患者和应用卡介菌接种。接种对象为新生儿和结核菌素试验阴性的儿童。接种方法为皮内注射0.1 mL（内含0.5～0.75 mg）的卡介菌。接种后2～3个月，查结核菌素试验，若由阴性转为阳性，表明接种成功，机体已产生免疫力。阴性反应表明接种失败，需重新接种。细胞免疫缺陷者应慎用或不用。近年由于卡介菌无效率及漏种率增高，给结核病的预防带来困难。另外，卡介菌为活菌制剂，应注意低温保存。预防结核病的DNA疫苗，现处于动物试验阶段。
麻风病目前尚无特异性预防方法。由于麻风分枝杆菌与结核分枝杆菌有共同抗原，曾试用卡介菌来预防麻风取得一定效果。该病防治主要依靠普查，和对密切接触者定期检查。早期发现病例，早期隔离治疗以避免传播。
白喉的预防应注意早期隔离、治疗病人。病人的分泌物及接触的物品进行消毒防止传染。特异性预防以人工主动免疫为主要措施。国内外均应用白喉类毒素和百日咳菌苗、破伤风类毒素的混合制剂（简称白日破三联疫苗），于出生后3个月初接种，4～5个月再次接种1次，2岁时加强1次，以后每5年加强免疫1次。对于病人密切接触的易感儿童，应立即肌注白喉抗毒素1 000～3 000U作紧急预防。使用前须进行皮肤试验，防止发生异种血清过敏反应。
百日咳的预防目前我国一直采用死菌苗和白喉、破伤风类毒素混合制成的“百白破”三联疫苗进行人工自动免疫，接种后能显著降低发病率和死亡率。接种对象为1岁以下幼儿。目前已开始使用多价无细胞百日咳菌苗，以减少副作用。必要时可用高效价百日咳免疫球蛋白进行紧急预防。
流感的预防可采用b型菌株的荚膜多糖疫苗对18个月以上的儿童接种，一年内保护率可达90%以上。
嗜肺军团菌感染的预防要加强人工水源的管理、监测；防止医院内感染；注意工作、生活的环境卫生等。目前尚无有效的疫苗。
肺炎克雷伯菌感染多为二重感染，易出现耐药性，因此，临床上最好先进行药敏试验，再选择敏感抗生素治疗。
2.治疗 目前，我国采用WHO建议推广的“直接督导下的短程化疗法”方案，即病人每次均由“督导员”（医务人员、社区志愿者或家属）在场目睹患者服用规定药物。疗程可缩短至6个月。国内外均推行三药联合方案，即异烟肼（H）、利福平（R）和吡嗪酰胺（Z）为主药。在耐药病例发生率较高地区，头2个月强化期需加第4种药，链霉素（S）或乙胺丁醇（E）。此方案可使病人获得约95%的治愈率。近年来结核杆菌耐药菌株日益增多，因此对久治不愈的病人，应做药物敏感试验，测定细菌耐药性，以指导临床合理用药。
麻风的治疗药物主要有氨苯砜、利福平、氮法齐明、氟喹诺酮类制剂、氯法齐明及丙硫异烟胺。目前多采用2～3种药联合治疗以防止耐药性产生。
白喉的治疗应尽早足量使用抗毒素。根据病情可用2万～10万U肌注或静注。使用前应做皮肤试验，阳性者需用脱敏疗法。同时要选用敏感的抗菌药物（青霉素、红霉素）作病原治疗。直至症状消失和白喉杆菌培养阴性为止。
百日咳、流感嗜血杆菌、嗜肺军团菌等感染治疗可选用敏感抗生素和对症治疗。百日咳选用大环内酯类抗生素和广谱抗生素如红霉素、氨苄西林等；流感嗜血杆菌采用特异免疫血清和磺胺类药物合并治疗效果好，也可用广谱抗生素；嗜肺军团菌首选大环内酯类抗菌药如红霉素。
肺炎克雷伯菌感染引起的肺炎，应及早使用有效抗生素是治愈的关键，首选氨基糖苷类抗生素，如庆大霉素、卡那霉素、妥布霉素、阿米卡星、异帕米星等。重症宜加用头孢菌素类如头孢孟多、头孢西丁、头孢噻肟等。部分病例使用氯霉素、四环素亦有效。