动物源性细菌的微生物学检查及防治原则
(一)标本采集
血液是布鲁杆菌检查最常用的标本,急性期血培养阳性率高达70%;骨髓在急性期、亚急性期病人均可分离阳性。病畜的子宫分泌物、羊水、流产动物的肝、脾、骨髓等也可作为分离培养的标本。
根据炭疽病型采取不同标本。皮肤炭疽取水疱、脓疱内容物或血液;肠炭疽取粪便、血液及畜肉等;肺炭疽取痰、胸腔渗出物及血液等;脑膜炎炭疽取脑脊液;可疑动物一般在无菌条件下割耳尖或舌尖组织送检。炭疽动物尸体严禁室外剖检,以防污染牧场及环境。
按鼠疫病不同病型采取淋巴结穿刺液、痰、血液等。人或动物尸体取肝、脾、肺、肿大淋巴结和心血等;陈旧尸体取骨髓。因鼠疫为法定甲类烈性传染病,其传染性极强,除标本采取时要严格无菌操作和控制外,标本必须送指定的具有严格防护措施的专门实验室,并按严格操作规程进行标本采集。
(二)形态学检查
直接涂片染色镜检为主要方法。炭疽病的标本,涂片进行革兰染色可发现有荚膜的呈竹节状排列的革兰阳性大杆菌,或用特异性荧光抗体染色镜检。鼠疫检材经革兰染色或亚甲蓝染色呈典型的两端浓染卵圆短杆菌,有时可见到吞噬细胞内外均有本菌。但在化脓或溃疡性病灶及腐败材料中可见菌体膨大成球形,且着色不佳。免疫荧光试验用于快速诊断。(https://www.daowen.com)
(三)分离培养与鉴定
将布鲁杆菌标本接种于双相肝浸液培养基(液相为肝浸液的琼脂斜面)置37℃、5%~10%CO2环境中培养。可根据菌落特点、涂片染色镜检、对CO2的要求、H2S产生、染料抑菌试验、玻片凝集等确定是否为布鲁杆菌及型别;可疑炭疽病标本接种于血琼脂平板和碳酸氢钠琼脂平板,培养后观察菌落,用青霉素串珠试验、噬菌体裂解试验等进行鉴定;对鼠疫耶尔森菌的检测须将检材接种于血琼脂平板或0.025%亚硫酸钠琼脂平板等,经27~30℃24小时培养后观察菌落特征。在液体培养基中观察钟乳石状生长。当分离出可疑菌落时,可作涂片镜检、噬菌体裂解试验、血清凝集试验等进一步鉴定。
此外,可将布鲁杆菌作为诊断抗原来测定被检者血清中有无特异性抗体,凝集效价达到1∶160以上,则有协助诊断价值。也可将布鲁杆菌素0.1 mL进行前臂掌侧皮内试验,注射后24小时、48小时观察注射部位,局部出现红、肿、硬节且直径>2.0 cm者为阳性,1.0~2.0 cm者为弱阳性,直径<1.0 cm者为阴性。阳性者说明机体感染过布鲁杆菌。炭疽病也可用免疫荧光法检查病人的荚膜抗体,用ELISA检查保护性抗体。必要时进行动物试验。
(四)防治原则
动物源性细菌感染的预防,主要以控制和消灭病畜、切断传播途径和免疫接种为主要措施。对布鲁菌病和炭疽病的预防重点应放在家畜感染的防治和牧场的防护上。经济型家畜血清学反应或皮肤试验阳性者隔离,分批淘汰:病畜应严格隔离或处死深埋,杜绝在无防护条件下现场剖检取材,死畜严禁剥皮或煮食,必须焚毁或深埋至2 m以下,与氧气隔离,以防形成芽孢造成长期污染。牛奶上市前进行巴氏消毒、家畜肉类煮熟后食用以防消化道传播;对家畜流产物、皮毛等应进行妥善处理以防接触传播;对易感家畜应用减毒活疫苗进行预防接种,免疫力可持续1年。人群接种对象是疫区皮革毛纺工人、牧民、屠宰牲畜人员、兽医等。预防鼠疫的基本原则是:灭鼠灭蚤是切断鼠疫传播环节、消灭鼠疫的根本措施。严格控制传染源,如发现鼠疫可疑患者要尽快隔离治疗,并立即以紧急疫情向有关机构报告。与患者接触者可口服磺胺嘧啶,每次1 g,每日2次;或四环素每次0.5 g,每日4次,均连服6天。对具有潜在感染可能性的人群进行预防接种。此外,严格执行检疫制度,加强国境、海关检疫。早期足量使用抗生素治疗是降低病死率的关键。腺鼠疫采用磺胺类+链霉素类药物治疗;肺鼠疫和败血症型鼠疫常用链霉素和阿米卡星或四环素治疗。