基因转染技术和核苷酸探针杂交技术揭示致癌基因的存在

致癌物和诱变物的发现，促使人们开始关注它们共同可能作用的内源基因的变化。如果想要确定某个基因是否与癌症的发生相关，有两个技术不得不被提到：一个就是磷酸钙介导的基因转染技术，另一个是核苷酸探针杂交技术。将某个可疑的基因转入正常细胞中，然后观察细胞是否发生癌变，可以帮助发现致癌基因。但是完成这项实验探索需要三个前提条件：一是发明一种能够携带基因进入细胞的方法，二是找到适合转染的正常细胞，三是需要明确向细胞中转入的基因是什么。这项技术最终在1972年得以实现，实验的内容就是提取致癌物处理过的癌变细胞的DNA或者患者肿瘤组织的DNA，包裹在磷酸钙为主体的介质中，将这些DNA转入正常小鼠来源的NIH3T3细胞中，然后观察细胞是否发生癌变。结果表明无论是癌变细胞还是肿瘤组织的DNA都可以重新使正常细胞发生癌变。这就直接证明了致癌基因的存在。

上面提到的DNA转染是将DNA的混合物一起转入细胞，发现可以产生癌变，但是这种方法并不能确定具体是哪一个基因起到了致癌的作用。这里科学家通过核苷酸探针杂交技术很快确认了病毒来源的序列是否存在于可以致癌的DNA中。具体来说，首先以逆转录病毒来源的核苷酸序列作为探针，检测致癌DNA中是否有可以与之配对杂交的对应序列。第一个被发现的致癌基因Ras就是采用大鼠肉瘤病毒的核苷酸序列制作为探针，在人膀胱癌来源的致癌DNA中发现有与之配对的序列。随后Myc、erbB、src、kit等病毒来源的致癌基因纷纷在人类肿瘤中被鉴定出来。