尼龙绢袋集卵孵化法
（一）器材
40～60目/25.4 mm铜丝筛（内径为7.5 cm，外径9 cm）、260目/25.4 mm尼龙绢袋、250 ml或500 ml三角或长颈烧瓶、搪瓷杯（或塑料杯）、放大镜、温度计、PH试纸、水桶等。
图5-2 锥形尼龙绢袋图
尼龙绢袋制作：取260目/25.4 mm尼龙绢剪成扇形裁片，两边以聚胺酯黏合剂黏合。上口用锦纶线缝一卷边，以8号铁丝弯成直径为8 cm的带柄圆圈，袋深大约20 cm，下口径大约1.5 cm（图5-2）。
（二）操作方法
（1）将筛子叠放于尼龙绢袋上，尼龙绢袋下口用夹子夹住。
（2）取受检者粪便30 g置于铜丝筛子中，用水冲淋，压舌板或竹签调浆，粗粪渣被筛留在铜丝筛中，可能存在的虫卵和细粪渣则被滤入尼龙绢袋中。
（3）移去筛子，继续用水冲洗袋内粪渣，用压舌板或竹签轻轻振荡尼龙绢袋外侧使过滤加速，直至滤出液变清为止。
（4）将尼龙绢袋下口移入烧瓶口内，取下夹子，将袋内的滤渣用孵化用水（无水中原生动物、无余氯、pH 6.8～7.2的清洁水）淋洗入烧瓶，继续加孵化用水满至离瓶口1 cm处。
（5）将盛有滤渣的烧瓶置于光照培养箱（20～30℃）或相同室温下孵化。在3 600～3 800 lx光照强度下，孵化4～12小时，需观察2～3次。观察时间随温度高低而不同，温度高时毛蚴孵出早，温度低时毛蚴孵出迟。参见表5-1。
每批实验均需设置血吸虫虫卵阳性粪便作为对照。
表5-1 不同温度下毛蚴观察时间
（三）毛蚴观察
观察毛蚴时，应将烧瓶向着光源，并衬以黑色背景，平视观察水面下0～4 cm范围内浮游生物，一般每个孵化瓶要观察3分钟以上。必要时可用放大镜观察。所有阳性结果，需要有2人以上观察确定。毛蚴应与水中原生动物相鉴别，见表5-2。
为提高检出率，如孵化阴性，可进行沉渣镜检虫卵。
表5-2 血吸虫毛蚴与水中原生动物的鉴别要点
如有疑问，可用毛细吸管将毛蚴吸出进行鉴别。吸取毛蚴的方法：捏住毛细管的橡皮头，使橡皮头内空气全部排出；将吸管伸进烧瓶颈部靠身体一侧，见毛蚴游至小吸管口前，轻轻放松橡皮头，将毛蚴吸入管内。然后将吸管内的水滴均匀滴于玻片上，置显微镜下（40～100倍）鉴别。为了便于观察，可加1滴碘液染色，或在玻片下稍许加温，或加1滴蓝墨水以杀死毛蚴，限制毛蚴的活动范围。
（四）结果判读(https://www.daowen.com)
查见血吸虫毛蚴即判定为阳性。
（五）注意事项
1.粪便 粪便必须新鲜，夏季保藏于阴凉处时不宜超过24小时，否则应保藏于4℃冰箱，但最迟不超过3天；粪量不足30 g的应退回重送。另外，切勿用包过农药、化肥或其他化学品的包装材料包粪便。
2.孵化用水 水质对孵化的质量至关重要。应采用无水中原生动物、无余氯、pH 6.8～7.2的清洁水进行孵化。
（1）pH调节：孵化用水需经过pH测试，若水质偏酸，可采用10％氢氧化钠溶液调节；若水质偏碱，可用10％盐酸溶液调节。调节至适宜酸碱度为pH 6.8～7.2。实验室制备的纯净水在调整pH后可作为孵化用水。
（2）去余氯：在城市用自来水孵化时，因含氯量过高，一般应将水放在敞口的缸内过夜，让其自然脱氯。一般气温高时过夜、气温低时24小时余氯可以全部逸去。急用时可在水中加入少量硫代硫酸钠（每50 kg水加硫代硫酸钠0.2～0.4 g）除氯半小时后使用。符合孵化用水余氯浓度应低于0.3 mg/L。
（3）去除原生动物：用河水或井水孵化时，可将水加热至60℃或经过滤，以除去水中原生动物。也可用含氯石灰（漂白粉）杀虫法，含氯石灰含有效氯30％；次氯酸钙（漂白精）含有效氯65％，平时必须妥善保管，以防有效氯逸去而失效。使用时每50 kg河水或井水中加漂白粉0.35 g（漂白粉精0.17 g）。
（4）去浑浊：为了澄清河水，每50 kg水可加入明矾1.5～2.0 g，浓度不宜超过0.02％，否则对孵化有抑制作用。
（5）被工业废水、化肥和农药污染的水和含盐量较高的水均不宜用作孵化用水。
3.温度 温度是促使虫卵孵化的必要条件，室温在20℃以下时，必须加温。加温方法可以根据工作条件和工作量选择。在室内用空调或取暖器，或者使用孵化箱，使孵化环境能保温在25℃左右。
4.光线 在室内或使用孵化箱时，要配备足够的日光灯作为光源，以促进孵化。
5.防止交叉污染 粪检用具每次用后都必须洗刷干净，清水洗净后用60～80℃热水浸泡杀卵。尼龙绢袋在每次使用后要正反两面洗刷，以防尼龙筛孔粘有虫卵，然后用80℃热水浸泡3分钟杀卵，避免交叉污染。
6.残余的粪便、粪渣、粪水和沉渣等处理 必须倒入指定的沉淀粪池中贮存或用药物杀卵，以防病原扩散。
7.尼龙绢袋 用过的尼龙绢袋要经常检查。使用过久，其孔目变形或孔目破损者要及时弃用，以免影响效果。
8.对阴性者进一步处理 建议对孵化后的残渣进行血吸虫虫卵镜检，以提高检出率。
9.对照 每次检查，均需要做血吸虫成熟虫卵阳性质控样品对照。当阳性参考样品孵化出血吸虫毛蚴时，表明孵化条件满足要求，结果可靠；反之，检查孵化条件后重做。阳性质控样品来源于感染血吸虫动物的肝脏或者粪便。
