2.菌种的培养

2.菌种的培养

1）菌种的选育系谱

注：1096和木-3系绿色木霉野生种。

2）菌种的分离

（1）分离用培养基：

①0.1%酵母膏，0.2%蛋白胨，2%纤维素粉*，2%琼脂，0.15%胆酸钠。

②10%～20%土豆汁，2%纤维素粉*，2%琼脂，0.15%胆酸钠。

③5°～7°Bix麦芽汁，2%纤维素粉*，2%琼脂，0.15%胆酸钠。(https://www.daowen.com)

④0.2%KH2PO4，0.14%（NH4）SO4，0.1%KNO3，0.05%MgSO4，7H2O，0.03%CaCl2·0.0005%FeSO4，7H2O，0.0002%CoC12，0.00017%ZnCl2，0.00016%MnSO4，0.00005%CuSO4，2%纤维素粉*，2%琼脂，0.15%胆酸钠。

*纤维素粉用磨碎的新华一号滤纸代替亦可。

（2）分离操作：

用玻珠制成单孢悬浮液，适当稀释后分别浇于上述任一种培养基的培养皿中，30℃培养40～60小时，挑取较正常的单个菌落入斜面培养。

3）菌种的培养

（1）斜面（或茄子瓶）的培养：培养基采用分离用培养基，减去胆酸钠。从培养皿或斜面接入孢子，置30℃，培养5～7天，待孢子转绿，即可取出，检查，正常者置冰箱备用。

（2）三角瓶（或铝盒）培养：取稻草粉900克，麸皮100克。（NH4）2SO425克，水2200～2500毫升，充分拌匀，分别装入三角瓶或铝盒中（若500毫升三角瓶，每瓶装干料15～20克；若1000毫升三角瓶，每瓶装干料30～35克；若铝盒，装料厚度以5厘米左右为宜）以双面绒布（或八层纱布）扎口，并复以牛皮纸以防潮湿，1.0公斤/厘米2杀菌1小时，冷却后，将斜面或茄子瓶中的孢子接种（或孢子悬浮液）摇匀，置30℃培养。第二日扣瓶一次（彻底摇匀），并开始保湿。第四天再扣瓶一次，（扣成小块）并停止保湿，只保干温。第五或第六日成熟，孢子长满，并转绿，即可出房，检查，无杂菌供备用。

（3）种曲培养（若用量不多，可用三角瓶或铝盒代替）。