8.酶组分的凝胶电泳分离法
(1)酶制剂制备:胞外或胞内酶液冷冻,缓缓加入3倍体积冷却至0℃以下的丙酮,以沉淀酶蛋白,冷冻离心(-5℃以下,3 000转/分,20分钟),收集沉淀,用无水丙酮脱水,抽滤,真空干燥,即得酶粉。
(2)聚丙烯酰胺凝胶电泳:基本上按照Davis[16]的方法。在10×0.5厘米玻璃管中制备聚丙烯酰胺凝胶,每管中注入1%酶制剂(配在400%蔗糖溶液中)0.04毫升(相当于蛋白质200微克左右),在Tris-甘氨酸(pH 8.3)缓冲液中电泳1小时半,每管电流2毫安,酶蛋白用氨基黑染色,并在7%醋酸中退去底色。(https://www.daowen.com)