槐糖和纤维素粉诱导的纤维素酶组分的比较
槐糖对EA3-867不同的酶组分具有同样的诱导能力。图9是EA3-867甘油培养物中加入槐糖和纤维素粉后,Cx和滤纸崩溃活力(F.D)的变化。在加入槐糖后,Cx和F.D活力立即同时被诱导出来,并远远超过纤维素粉的诱导结果。在另一批试验中证明,槐糖诱导的纤维素酶能分解脱脂棉,产生葡萄糖,其活力也超过纤维素的诱导结果,表明槐糖同纤维素一样,也能诱导C1酶的形成。此外,两者对Cx酶和纤维二糖酶的胞内胞外部分都有诱导作用(见图10)。而且胞外的Cx酶明显高于胞内,可能意味着进入细胞的槐糖,先诱导胞内的Cx酶合成,之后立即分泌到胞外。纤维二糖酶在胞内胞外的分布较均匀。Suzuki等认为,在萤光假单胞菌中槐糖诱导的Cx是胞外酶,纤维二糖酶主要是胞内酶[19]。
EA3-867 孢子接种在甘油无机盐培养基中,分甘油对照(即不加任何诱导剂)、加纤维素粉(0.5%,0小时加入)和加槐糖(10-4 mol/L,48小时加入)三组样品,于32~33℃振荡培养,在Cx活力达高峰(槐糖组是6天,纤维素粉组是12天,甘油对照是6天)时,分别取出,制备胞外、胞内酶制剂,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(见图11)。
图9 木霉EA3-867在甘油无机盐培养基中加纤维素粉或槐糖诱导的Cx酶和滤纸崩溃活力(F.D.)的变化
注:100毫升培养基,30℃振荡培养,纤维素粉(0.5%)在0小时加入,槐糖在培养48小时加入(10-4 mol/L)。
图10 木霉EA3-867在甘油无机盐培养基中加槐糖或纤维素粉所诱导的Cx酶和纤维二糖酶在胞内胞外分布的比较50毫升培养基,在30~32℃培养
图11 纤维素粉和槐糖诱导的木霉EA3-867纤维素酶(胞内、胞外)的凝胶电泳图
注:50毫升甘油无机盐培养基,孢子接种后,于32~33℃振荡培养,分甘油对照(不加诱导剂)、0小时加纤维素粉(0.5%)和48小时加槐糖(10-4 mol/L)三组,在Cx活力达高峰时,分别取出,制备胞内、胞外酶制剂,配成1%浓度(溶于40%蔗糖溶液中),进行凝胶电泳,每管加酶400微克,电流24毫安,电泳时间1小时半,用氨基黑染色。
三组凝胶电泳图大致都可分为主要的6条蛋白区带(Ⅰ~Ⅵ),在加入纤维素粉或槐糖后,蛋白带Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ明显加深,尤其是加槐糖后,Ⅲ和Ⅳ最深。据凝胶分段切割测定,蛋白带Ⅲ主要含C1酶(测棉花糖),Ⅳ代表Cx酶,Ⅴ代表β-葡萄糖苷酶。在甘油对照中同样有这些蛋白带,但量极微。(https://www.daowen.com)
表1所列是另一次试验中纤维素粉和槐糖诱导的酶制剂中各种酶活力测定的结果。纤维素粉和槐糖只诱导纤维素酶。果胶酶和淀粉酶——可能是组成酶,量极微,不能诱导半纤维素酶和蛋白酶。凝胶电泳的蛋白带也相似。
表1 纤维素粉和槐糖诱导的酶制剂活力比较*
注:*100毫升甘油无机盐培养基,孢子悬浮液(EA3-867)接种,30℃振荡培养,纤维素粉在0小时加入(1%),槐糖的培养48小时加入(10-4 mol/L)。在纤维素粉中培养14天(产酶高峰)和槐糖中培养5天(产酶高峰)的培养滤液制成丙酮粉,均配成1%浓度,进行各种酶活力的测定比较。凝胶电泳的条件同图11。