槐糖、纤维二糖和纤维素粉对木霉EA3-867甘油培养物纤维素酶形成的影响

2.槐糖、纤维二糖和纤维素粉对木霉EA 3-867甘油培养物纤维素酶形成的影响

1）在甘油培养基中生长、甘油利用和pH的变化

EA3-867 孢子悬浮液接种在甘油无机盐培养基中液体振荡培养7～8小时，在显微镜下可见到孢子开始膨胀萌发，12小时有少量菌丝长出，24小时明显长出肉眼可见的菌丝，36小时开始生孢子，48小时后培养液开始转淡绿，生长基本上停止，以后菌丝体自溶减少，至第7天，残存的菌丝体已极少（见图4）。上述EA3-867的生长曲线可分为延迟期（12小时前）、对数期（12～48小时）、稳定和自溶期（48小时以后）。

2）甘油培养物中加槐糖、纤维二糖和纤维素对纤维素酶形成的影响

EA3-867在甘油无机盐培养基中培养，纤维素酶活力极微弱。添加纤维二糖（5×10-4 mol/L）不能诱导Cx酶产生。但如添加0.5%纤维素粉或低浓度槐糖（5×10-4 mol/L），则纤维素酶能大量产生（见图5）。但以纤维素为诱导剂时，产酶至少要有三天以上的延迟期；而槐糖可使产酶延迟期缩短为数小时，不论在产酶速度或活力方面均远远超过纤维素。

槐糖诱导纤维素酶合成的能力，与添加槐糖的时间有关；但是产酶的时间，与添加槐糖的时间无关（见图6）。培养48小时加槐糖，诱导产酶最高，24小时，尤其在开始培养时（0小时）加入槐糖，产酶会大大减弱；不论槐糖加入的时间多早，纤维素酶均在培养48小时后才产生。这些现象可能归因于生长稳定期前甘油对酶形成的阻遏

作用和槐糖本身在培养过程中被消耗，此可以从洗涤菌丝体的诱导试验（待发表）和图7的试验中得到证明。从图7中可以看到，EA3-867甘油培养物在48小时加入槐糖，隔12小时便明显出现酶活力，24小时后达到高峰，48小时后（即培养第4天）Cx活力开始下降，此时，用酚-硫酸法测定，培养液中槐糖已用光。若此时再次补加槐糖，则纤维素酶又恢复合成。但在48小时菌龄的甘油培养物中若同时加入槐糖和甘油，则酶的产生便明显受阻，而且到培养第4天，即使再补加槐糖，纤维素酶也不再继续合成。