葡萄糖母液中诱导剂的分离和鉴定

2.葡萄糖母液中诱导剂的分离和鉴定

葡萄糖母液为何能诱导纤维素酶形成？其所含的未知诱导剂是什么？为此，对葡萄糖母液进行活性炭层析和纸谱分离，并作诱导剂成分的鉴定和活性测定。

1）活性炭层析分离和活性测定

葡萄糖母液经活性炭层析分离后，得到水洗脱液和酒精（7%）洗脱液二部分，分别浓缩至干，并都配成相当于0.1%葡萄糖母液浓度的水溶液，测定葡萄糖母液、水洗脱部分和酒精洗脱部分对拟康氏木霉不同菌株菌丝体纤维素酶的诱导能力（见表2）。结果发现，主要的活性部分是在7%酒精洗脱液中，而水洗脱液中活性甚少。根据过去的试验，7%酒精洗脱液中主要含双糖（朱雨生等，1978）。

2）纸谱分离和活性测定

将酒精洗脱部分和水洗脱部分进一步作纸谱分离，结果如图1和表3所示。

根据用苯胺一二苯胺试剂的显色斑点判断，葡萄糖母液主要含有四个斑点。RG分别为（A）1.00、（B）0.42、（C）0.26、（D）0.08。RG 1.00和0.26的斑点分别相当于葡萄糖和龙胆二糖；RG 0.08的斑点可能是叁糖（位置同棉子糖相当）；RG 0.42的斑点，根据位置和特殊的显色（棕黄色）断定，是槐糖。四种糖的含量是葡萄糖＞＞龙胆二糖＞＞槐糖及未知叁糖。水洗脱液中主要含葡萄糖、少量的龙胆二糖和微量的槐糖；酒精洗脱液中葡萄糖很少，而以槐糖和龙胆二糖两种双糖为主。这四种糖中，只有槐糖是已知的拟康氏木霉纤维素酶的强力诱导剂，酒精洗脱液的诱导活性强，正是由于其中所含槐糖合量高的缘故。

为了进一步确定这四个斑点中糖的作用，将与四个斑点位置相当的邻近未显色的同一张纸谱，依次剪成四段，即A、B、C、D分别剪碎，用80%酒精于70℃下浸提，离心，上清液于70℃烘干，配成相同的浓度，测定它们的诱导活性（见表4）。结果证明，B段的诱导活性最高，是槐糖。A段（葡萄糖）没有诱导活性。C段（龙胆二糖）和D段（未知叁糖）也有部分诱导活性，很可能是由于糖的纸谱分离不完全而混入了槐糖杂质之故。为此，测定了标准的龙胆二糖（10-4 mol/L）对不同木霉菌株洗涤菌丝体纤维素酶的诱导能力（见表4、表5），结果证明，龙胆二糖的诱导活性很低。由此可见，萄萄糖母液对木霉纤维素酶的诱导作用主要由于其中含有槐糖的缘故。(https://www.daowen.com)

最后，根据葡萄糖母液中的槐糖含量分析，寻求其含量与标准槐糖诱导活性的数量关系。槐糖是非还原糖，葡萄糖母液中非还原糖（主要是槐糖）约0.4%，则在0.5%葡萄糖母液中所含的槐糖量应在10-4 mol/L数量级。同时，根据葡萄糖母液中含葡萄糖30%～40%计算，0.5%葡萄糖母液中还应含有10-2 mol/L数量级的葡萄糖。此结果，恰好同表1试验中，0.5%葡萄糖母液同10-4 mol/L槐糖加10-2 mol/L葡萄糖的诱导活性相仿的推断一致。这种数量关系的吻合，更进一步证实，葡萄糖母液的诱导作用归因于其中的槐糖。