变异株和野生型菌株在不同培养基中纤维素酶活性的比较
试验分别比较了四株菌株在稻草粉培养基(见表2)、纤维素粉培养基和甘油槐糖培养基中液体培养时纤维素酶活性的差异(见表3)。可知,变异株的Cx酶、滤纸糖和棉花糖等活性均有较明显的提高,尤其在稻草粉培养基中,酶活提高更为明显。
表4和表5是四株菌株洗涤菌丝体用槐糖诱导的胞外纤维素酶和酶制剂纤维素酶各组分活性的比较,证明了变异株纤维素酶的诱导活性有了显著的增加。由表2和表5还可看出,变异株胞外可溶性蛋白含量也有所增加。
表1 四株菌株在不同培养基上菌落大小(琼脂平板上)和菌丝体生长(摇瓶培养中)的比较
注:*马铃薯葡萄糖培养基(%):马铃薯20。葡萄糖2,琼脂2。
合成培养基(%):纤维素粉2,(NH4)2SO4 0.14,KH2PO4 0.2,尿素0.03,MgSO4·7H2O 0.03,CaCl2 0.03,FeSO4·7H2O 0.000 5,CoCl2 0.000 2:ZnCl2 0.000 17,MnSO4 0.000 16,琼脂2。
蛋白胨酵母膏培养基(%):蛋白胨0.2,酵母膏0.1,琼脂2。
所试菌种在上述培养基平板上作单菌落培养,30℃,3~4天后测量菌落大小。
**合成培养基配方同上,但纤维素粉用0.6%甘油代替;蛋白胨酵母膏培养基是在合成培养基中增加蛋白胨0.2%,酵母膏0.1%,孢子悬浮液接种后,于30℃振荡培养2天后,测定菌丝体重量。
表2 四株菌株在稻草粉培养基中(摇瓶)纤维素酶活力的比较*
注:*培养基配方和培养条件见方法部分说明。
**滤纸膨胀软化为+;滤纸破碎断裂,但仍成形为++;滤纸完全崩溃,呈糊状为+++。⊥代表滤纸崩溃程度比“+”差。
表3 四株菌株在纤维素粉培养基和甘油培养基中纤维素酶活力的比较
注:*培养基见方法部分,32℃,往复式摇床(108次/分)培养7天。
**培养基见方法部分,32℃,往复式摇床(108次/分)培养2天,加入槐糖(10-4 mol/L),再继续培养5天,测定酶活。
表4 四株菌株洗涤菌丝体用槐糖诱导形成纤维素酶活力的比较
注:菌丝体重量:1096:12.9毫克/瓶,EA3-867:11.4毫克/瓶,木-3:13.1毫克/瓶,N2-78:9.5毫克/瓶。
槐糖浓度10-4 mol;诱导温度30℃;诱导时间24小时。
表5 四株菌株洗涤菌丝体用槐糖诱导形成的纤维素酶制剂活力的比较*
注:*四株菌株在甘油培养基中于27℃分别培养48小时的菌丝体(各200毫升菌丝培养物)用缓冲液洗涤后,加3×10-4 mol/L槐糖,再振荡培养24小时,胞外酶液冷冻真空干爆,即成胞外酶制剂,均配成1%浓度测定。