变异株和野生型菌株纤维素酶诱导形成时对槐糖诱导和葡萄糖阻遏敏感性的比较
对四株菌株洗涤菌丝体用不同浓度的槐糖诱导其纤维素酶的形成,发现变异株和野生型菌株对槐糖的敏感性是不同的。变异株EA3-867和N2-78用10-6 mol/L槐糖即能诱导纤维素酶的形成,而野生型菌株1096和木-3要用10-4 mol/L槐糖才能诱导纤维素酶的形成。两者槐糖浓度差异达100倍(见表6)。曾比较了四株菌株对槐糖的利用情况,未见对槐糖的吸收利用有明显的差异。
图1 四株拟康氏木霉菌株洗涤菌丝体用槐糖诱导形成的纤维素酶凝胶电泳的扫描图
图2 N2-78纤维素酶凝胶电泳示意图及其酶活分布
图3 四株拟康氏木霉菌株在合成培养基琼脂平板上菌落形态、大小的比较(30℃,生长4天)
1096、木-3为野生型菌株,EA3-867和N2-78分别为纤维素酶高产变异株
图4 四株菌株洗涤菌丝体用槐糖诱导形成的纤维素酶(胞外)聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱(电泳2小时)
图5 四株菌株洗涤菌丝体用槐糖诱导形成的胞内酶聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱(电泳2小时)
图6 拟康氏木霉四株菌株在蛋白胨酵母育培养基平板上的菌落形态、大小比较(30℃,生长3天)
表6 四株菌株洗涤菌丝体纤维素酶诱导形成对槐糖敏感性的比较
注:菌丝体重量:1096:12.0毫克/瓶;EA3-867:9.5毫克/瓶;木-3:12.7毫克/瓶;N2-78:8.5毫克/瓶。
诱导温度28℃;槐糖浓度10-4 mol/L。
表7是四株菌株洗涤菌丝体用槐糖诱导形成纤维素酶对葡萄糖阻遏敏感性的比较,证明了变异株和野生型菌株对葡萄糖阻遏的敏感性也是不同的。变异株EA3-867和N2-78纤维素酶诱导形成只能被10-2 mol/L浓度的葡萄糖所阻遏,而野生型菌株1096和木-3显然对葡萄糖阻遏较为敏感,10-3 mol/L浓度的葡萄糖即能阻止槐糖对洗涤菌丝体纤维素酶的诱导作用,两者浓度相差10倍。(https://www.daowen.com)
若将四株菌株的洗涤菌丝体先同槐糖预保温17小时,让纤维素酶充分形成,然后,加入不同浓度的葡萄糖,同样证明变异株同野生型菌株纤维素酶形成对葡萄糖阻遏的敏感性差10倍(见表8)。
表7 四株菌株洗涤菌丝体纤维素酶诱导形成对葡萄糖阻遏敏感性的比较
注;菌丝体重量1096:14.7毫克/瓶;EA3-867:10.7毫克/瓶;木-3:12.7毫克/瓶;N2-782.8毫克/瓶;槐糖浓度:10-4 mol/L;诱导温度:30℃。
表8 四株菌株洗涤菌丝体与槐糖预保温后加入不同浓度葡萄糖对纤维素酶诱导形成阻遇作用的比较
(续表)
注:菌丝体重量1096:13.0毫克/瓶;EA3-867:8.5毫克/瓶;木-3:11.7毫克/瓶;N2-78:6.0毫克/瓶。
洗涤菌丝体先与槐糖(10-4 mol/L)静止保温(20℃)17小时,取样测定,作为0小时Cx酶活(单位/毫升酶),1096为2.6,EA3-867为8.0,木-3为3.2,N2-78为5.6。立即加入不同浓度葡萄糖,于30℃振荡培养2小时、7小时测定Cx活力变化。