四、龈沟液检查
龈沟液是来自牙龈组织的渗出液,其成分主要来源于血清和局部牙龈结缔组织,通过牙龈沟内上皮和结合上皮。正常情况下,龈沟内液量极小,当牙周致病菌产生的毒素和菌斑激活牙龈中的各种细胞,产生炎症,龈沟壁及结缔组织水肿,其产物渗透压增加,多种细胞因子进入龈沟液中,使龈沟液不但液量增加,其内容物如特异抗体、细胞因子、炎症介质等的水平也发生变化。龈沟液不同内容物水平的变化反映了牙周组织的不同病变情况,对牙周炎的诊断、疗效观察和预测疾病的发展及预后有重要意义。龈沟液取样简便无创伤,又能重复采样,易为患者所接受,可作为牙周炎诊治中的辅助手段。
1.龈沟液的采集方法
目前,龈沟液的采集方法包括龈沟液冲洗法、滤纸条法和微吸管法,其中滤纸条法是目前最常用的方法。
2.龈沟液的定量方法
龈沟液有茚三酮染色定量法、称重法和用龈沟液测定仪(periotron)测量三种定量方法。这三种方法都先要用一定宽度和长度的滤纸条放入龈沟中30秒,然后测定滤纸条上的龈沟液量。其中以龈沟液测定仪的测量最为精确和方便,但其检测范围小,如Periotron 8000检测的理想范围为0.1~1.2 μL,并且相关仪器及其配套滤纸价格较贵,这些都限制了Periotron在临床研究中的应用。同时,市场上的滤纸种类繁多,众多对龈沟液的研究所选用的滤纸种类不一,较为常见的有whatman 1#定性滤纸、whatman 3#定性滤纸、whatman 3mm层析滤纸等。有学者对periopaper(Harco)、whatman 1#层析滤纸、whatman 4#层析滤纸和whatman 3mm层析滤纸进行比较,认为不同滤纸条对蛋白的洗提和回收的效率有所不同,其中2 mm×8 mm大小的whatman 3mm层析滤纸条对血清蛋白的回收率最高。(https://www.daowen.com)
3.龈沟液的成分
龈沟液的成分众多,血清中的绝大部分成分均可在龈沟液中出现,如补体-抗体系统成分、电解质、蛋白质、葡萄糖、酶等,也含有白细胞(主要为通过龈沟上皮迁移而出的中性粒细胞)、脱落的上皮细胞等,还有细菌及其他微生物的菌体和细菌产物(如脂多糖内毒素、胶原酶、透明质酸酶、破骨因子和短链脂肪酸等),局部牙周组织和细胞的破坏产物(如天冬氨酸转氨酶、碱性磷酸酶、溶酶体酶、β-葡萄糖醛酸酶等)也能在龈沟液中被检出。牙周炎发生时,龈沟液出现较多的各种细胞因子、炎症介质,如白细胞介素1、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α、前列素E2等,这些与牙周炎的程度和活动性有一定的关系。
某些药物通过全身给药途径进入体内后,也可参与龈沟液的组成。如口服四环素进入机体后,其对骨组织亲和力大,易渗透进龈沟液,龈沟液内的药物浓度可为血清的2~7倍,对抑制厌氧菌和螺旋体特别有效,可作为临床工作选择全身用药和局部用药的参考依据。