1 洋葱根尖切片
·取材
将洋葱鳞茎放在装有清水的小烧杯口上,在潮湿的条件下,不定根从鳞茎盘四周生长出来,当不定根生长到1.5厘米左右时,在中午11时至下午1时左右,用剪刀剪取根尖0.5厘米长的材料进行固定(用种在土中或其他地方的洋葱鳞茎的不定根,以自来水洗净后固定也可),在上述时间取材固定,是因为这个时候细胞的有丝分裂较频繁。
·固定
用铬醋酸固定剂:10%铬酸水溶液7毫升,10%醋酸水溶液10毫升,蒸馏水83毫升。
固定时间:12~24小时,然后放在流水中冲洗24小时,将铬酸洗涤干净。
·脱水
在35%、50%、60%的酒精中各脱水1.5小时左右,放在70%酒精中过夜。依次移入80%、95%酒精中各1.5小时左右,然后放到纯酒精(Ⅰ)、纯酒精(Ⅱ)中各脱水1小时。
·透明
等量纯酒精与二甲苯混合液中浸泡2小时(每隔1小时换1次新的混合液),放入少量的番红粉末然后再放到二甲苯(Ⅰ)、二甲苯(Ⅱ)中透明,各30分钟。
·浸蜡与包埋
当材料放在二甲苯(Ⅱ)中就要加蜡,浸蜡与包埋照上述的方法进行。
·切片
要观察洋葱根尖分生组织的细胞的有丝分裂,要用纵切面,其厚度为10微米。
·粘贴
用甘油蛋白粘贴剂。将蜡带中间部分切成小段(每段4~5个切片),光一面朝下贴在玻片上。贴时应注意方向,切片材料的长轴与载玻片的长轴成垂直排列,经烫片、烘干后进行染色。
·染色
将干燥切片进行脱蜡,然后从高浓度的酒精逐渐下降至水。取出后放在2%铁明矾液中媒染10~20分钟,先在流水中冲洗10分钟,再放在蒸馏水中洗一下,然后移入0.5%苏木精染液中染色15分钟,水洗10分钟,洗去多余的染料,然后放在苦味酸饱和水溶液中进行分色,1小时左右便分色清楚(有时要2小时多)。然后用流水冲洗30~50分钟,直至将苦味酸洗尽,再用1%的氨水(1∶100)处理1分钟后,顺次按35%、50%、60%、70%、80%、95%酒精脱水,各级时间5~10分钟。纯酒精中放置时间不能太长,一般3分钟左右便可。切片经过二次纯酒精,第一次3分钟,第二次2~3分钟,然后移入等量纯酒精二甲苯混合液中3-5分钟,再用二甲苯(Ⅰ)透明2~3分钟,二甲苯(Ⅱ)透明3分钟,最后用中性树胶或加拿大树胶封固,右边贴上标签。其结果:细胞壁蓝色,细胞质淡蓝色或灰色,染色体深蓝色,特别是细胞正在进行有丝分裂,则其染色体很清楚。在一张切片上,根的分生组织区,可以看到细胞进行有丝分裂的各个时期。
我们曾多次用1%的番红(50%酒精配制)和0.5%的固绿二重对染法,其染色效果也很好。