2 水稻茎的切片
·取材
当水稻开花时,取茎中间几个节间,用水冲洗一下,剪成3毫米长的小段。
·固定
将上述材料放在小指管内,倒入FAA固定液(1∶20),抽气后,材料沉入固定液中,更换一次固定液,固定12~24小时。长一点也无妨。
·脱水
固定后用50%酒精浸洗2次,每次浸洗约1小时左右,然后放到70%酒精中过夜。取出材料,依次浸在80%、95%酒精中,每级酒精2小时左右。然后放到纯酒精中2小时(分两次)。
·透明
等量纯酒精二甲苯液中浸3小时,并放入少量的番红粉末,再用二甲苯(Ⅰ)、二甲苯(Ⅱ)各透明1小时。
·浸蜡
将装透明过的水稻茎及二甲苯的小指管中放入一条小纸带,再将处理过的蜡片或浮蜡投入指管中的小纸带上(小纸带浸在二甲苯中),逐渐使放蜡的量与二甲苯相等,放到35℃温箱中(塞紧指管塞)6~12小时,然后打开指管塞,放在56℃的温箱(或有自控的浸蜡箱)中。一般要使温箱的温度比石蜡的熔点高2~3℃,让二甲苯慢慢蒸发掉,使蜡的浓度变浓。2小时以后倒掉小指管中的熔蜡,用镊子将材料小心地拨入有融熔纯石蜡的小酒杯中,最好用熔点为56℃~58℃的石蜡(但要看气温而定,气温高用熔点高的蜡,相反,用熔点低的蜡)。2~3小时后又换一个小酒杯,小酒杯里也盛着纯蜡,换2~3次后,便可包埋,在纯蜡中浸蜡时间长一点也没有关系。
·包埋
按照一般要求进行包埋。
·切片与粘片
水稻茎中含有硅质,容易使刀口变钝,而影响切片效果。因此要经常保持刀口锋利。取一段切下的蜡带放在显微镜下观察,检查一下切片质量。如果合乎要求,便可将蜡带切成一段一段,然后用蛋白甘油粘贴剂进行粘片,放在烫片台上展片前要把多余的水用吸水纸吸掉。再放在烫片台上使切片展片后慢慢干燥,或将快干燥的片子放在烘片架上,放在35℃的恒温箱中24小时左右,使切片干燥,便开始脱蜡及染色。假如不马上染色,可将烘干的片子放在切片盒中,并在盒子上贴上标签,注明盒子中切片的名称、时间。
·染色
用番红、固绿对染的方法。
脱蜡:将烘干的切片(有时可将切片稍稍加热)放在二甲苯中脱蜡,经100%、95%、80%、70%、50%酒精,再放到1%的番红染液中染色12~24小时,用50%的酒精冲掉多余的染料,然后进行脱水。50%、70%、80%、95%酒精中各3~5分钟,再将片子放在0.1%固绿染色液中染色1分钟左右(或滴染1分钟),用95%酒精冲洗一下,转用纯酒精洗3~5分钟后,将切片放在等量纯酒精二甲苯混合液中5分钟,再放入二甲苯(Ⅰ)、二甲苯(Ⅱ)中各3分钟,最后用中性树胶封固,贴上标签,注明切片名称,横切面或纵切面,制作日期等。
切片在显微镜下可以看到表皮、基本组织、维管束、髓腔等,每个维管束由维管束鞘、木质部、韧皮部等组成。木质化的细胞壁被染成红色,纤维素的细胞壁被染成绿色,细胞质被染成淡绿色。
[1]用各级酒精脱水,在一个指管中也可用吸管依次吸掉酒情,又依次加入酒精。