荧光显微镜技术的应用

四、荧光显微镜技术的应用

荧光显微镜技术包括显示组织细胞的自发性荧光法、荧光染色法和免疫荧光染色法。

1.组织细胞的自发性荧光法

如动物组织一般呈弱淡蓝色荧光，弹力纤维呈亮淡蓝色荧光，红细胞血红蛋白中的卟啉呈红色荧光，但在正常情况下，卟啉和血红蛋白中的铁离子相结合，铁离子有抑制荧光作用，所以红细胞不发荧光。若在血液中加酸使铁离子游离，或缺铁性贫血，红细胞可呈红色荧光。细胞内的脂褐素呈棕黄色自发性荧光。神经内分泌细胞内的儿茶酚胺、5-羟色胺和组胺在一定条件下可与醛类物质发生缩合反应而呈现黄绿色或黄的荧光等。

2.荧光染色法

荧光染色法可以显示细胞的某些形态结构，分析细胞的分化程度，鉴别细胞的生死，观察细胞内某些生物化学成分的含量变化，从而探讨细胞的功能状态。荧光染色法分活细胞荧光染色法和固定细胞荧光染色法。

（1）活细胞荧光染色法(https://www.daowen.com)

应用0.01%吖啶橙（acridine orange，AO）生理溶液浸染培养的细胞、血细胞、精子、寄生虫和虫卵，可以鉴别它们的死亡率。活细胞经AO染色，细胞核呈黄绿色荧光，细胞质为绿色荧光，胞质内的蛋白多糖为橘红色荧光；而死亡细胞的核DNA解聚，核变为红色荧光等。

（2）固定细胞荧光染色法

AO荧光染色是一种很好的细胞化学染色法，染色标本图像鲜明清晰。AO荧光染色和经过分化后，细胞核内的DNA呈现黄绿至黄色荧光，DNA含量越多荧光越黄越亮；细胞质和核仁内的RNA呈橘黄色至橘红色荧光，RNA含量越多荧光越橘红越鲜艳等。

3.免疫荧光染色法

其具有免疫反应的特异性和荧光显色的敏感性，已广泛应用于生命科学的研究和医学临床检测，如检测自身免疫性疾病患者的血清、组织中的循环抗体等。

（马　岚）